韭菜组织培养研究进展

2020-07-17

韭菜(Alhbm tuberosum Rottl．ex Spreng．)别名草钟乳、起阳草，百合科葱属多年生宿根草本植物。染色体数32。含丰富的维生素C、碳水化合物及硫、磷、铁等矿物质，尤其富含胡萝卜素和纤维素，还含有辛香的挥发性物质--硫化丙烯，有增进食欲和杀菌的作用。其种子在中药学上称作韭菜籽，含有生物碱及皂苷等。韭菜叶、根和种子均可作中药，味辛、性温，有温中行气、散血解毒的功效。韭菜原产于中国，栽培历史悠久，三千多年前就有献羔祭韭的诗句。韭菜耐寒、适应性强，我国东自滨海，南至海南，西及青藏，北抵黑龙江都有栽培。我国是韭菜生产大国，每年都有韭菜出口日本，近两年向日本出口的韭菜数量增加了8倍，但韭菜品质一直没有日本本国生产的好。我国已加入WTO，为了保证出口韭菜在海外的市场份额与竞争力，采取相应措施提高品质是非常必要而紧迫的。

1 概况

自德国植物学家Haberland提出植物细胞的全能性理论并进行离体培养探索以来，历经100年，经过科学家们不遗余力的努力探索和研究，植物组织培养逐渐趋于成熟，形成了一门效益显著的技术科学。它不仅在遗传学、生理学及病理学等学科的理论研究上具有重要的意义，而且在植物育种和生产应用上也有着明显的实用价值。对于韭菜组织培养的研究，早在1977年Zee等就已培养韭菜无菌苗幼叶获得了再生苗，但植物的再生频率较低阎。近20多年来，随着国内外对韭菜组织培养研究的增多，现已建立了高频韭菜植株再生体系，为基因工程技术在韭菜遗传改良上的应用奠定了基础。

2 研究进展

2．1 器官片段作外植体的组织培养

①花序培养郝建平等(1995)将韭薹未张开的花序用0.1％升汞消毒10 min，无菌水冲洗3次，剥去苞片以后，切取内部花序，接种于附加不同种类和浓度的MS培养基上分化形成愈伤组织。愈伤组织在分化培养基中分化成苗或者不经继代直接分化成苗。在含有NAA的培养基中分化生根，形成完整的再生植株。Nair等(1993)诱导山韭花蕾愈伤组织产生，然后在BDS+2，4-D 1 mg／L+BA 3 mg／L培养基中培养再生芽，诱导生根后90％的再生植株能够成活。 ②茎尖培养茎尖是最常用的外植体。秦波等(2002)rq取生长健壮无病虫害的圣堂野生大叶韭菜为供试材料，清水洗净，剪去叶片和根，切除多余茎段。将消毒好的材料在无菌条件下剥去余下叶，取出茎尖接入MS+2，4-D 2 mg／L+KT 1 mS／L+ZT 1mg／L十蔗糖30 g／L+琼脂5 S／L诱导培养基上，30天后大部分培养基上出现愈伤组织和丛生芽。将诱导组织分切后放入MS+KT 1 mS／L+ZT 1 rog／L+NAA 1 mg／L+蔗糖30 g／L+琼脂5 g／L增殖培养基中，增殖3-5代后，可获得许多不定芽。再将增殖产生的健壮不定芽转入1／2 MS+BA 0．2 g／L+NAA0．5 mg／L+蔗糖30 g／L+琼脂5 g／L的生根培养基上，经过20-30天，可获得大量生根苗，且每一小苗可长出3-5条根。 ③鳞茎培养贾芬等(1995)将消毒后的韭菜种子接到MS培养基上，待发芽长成小苗时切取鳞茎，接种在MS+6-BA 1 mg／L十3％蔗糖的诱导培养基上，约20天基部出现斑黄色愈伤组织，3-5天后，大多形成黄色小瘤状，表面尖滑，尖端出现小绿点，一周后均形成芽，15天后将长出的丛生鳞茎去掉顶端部分，转接到1／2 MS+I．5％蔗糖的生根培养基中，10天左右下部产生白色小点，并逐渐长出白色不定根，成为完整植株。将试管苗炼苗1天，移栽到培养土中，15-20天后长出新叶即可定植田间，成活率可达85％1：2上。 ④根尖培养研究表明，韭菜根尖也是培养植株再生的优良外植体。Shuto等(1993)用韭菜的根尖(0．2-0．3 mm)培养，在MS+NAA 1 mg／L上诱导愈伤组织，然后在MS或MS+BA 0．01 mg／L上分化芽和根，形成再生植株。张松等(2002)把消毒后的韭菜种子置于MS基本培养基上，种子萌发后取0．5-1．0 mm的根尖为外植体，接种于MS附加不同浓度的NAA和BA的诱导培养基上。结果发现在MS+NAA 1 mg／L+BA 2 mg／L培养基上可一次成芽，芽分化频率高达65．4％-83．7％，出芽数达40．1-46．7个，在2-3个月的时间内可以获得大量的再生植株。

2．2 单倍体培养

自从San Noceat(1976)用胚珠培养出单倍体起，通过体外雌核发育途径再生单倍体植株成为有些植物上取代花粉(药)培养的有效途径。田惠桥等(1989)用韭菜未传粉子房在MS+ZT 0-2 mg／kg+2-甲基-4-氟苯氧乙酸(Mcpa)上从胚囊中诱导出单倍体植株；同时研究还表明韭菜的反足细胞的胚胎发生频率高于卵细胞。Kojima(1989)建立了花顶培养一胚珠培养一胚培养的再生韭菜双单倍体的培养体系。

2．3 培养基及影响因素

韭菜组织培养常以MS(Murashige and Skoog，1962)为基本培养基，其中蔗糖浓度一般为1．5％-3．0％，琼脂5-7 g／L，pH值5．8-6．0。 ①基因型的影响张松等对韭菜不同基因型不定芽的分化进行研究，在MS+NAA 1 mg／L+BA2 mg／L培养基上接种不同品种的根尖外植体，30天后调查不定芽的分化情况。结果发现供试的14份材料均能产生愈伤组织和分化不定芽，且产生愈伤组织的外植体多数能再分化形成不定芽，分化数目也较多，愈伤组织分化频率较低的品种出芽率也较低。 ②激素对愈伤组织的影响研究表明，在韭菜花序的组织培养中，只添加生长素(NAA或2，4-D)的培养基中愈伤组织的生长量很少。细胞分裂素与生长素配合使用，则出愈率较高，其中6-BA的效果优于ZT和KT。适当提高6-BA的浓度(1 mg／L)对愈伤组织的形成有利。高浓度的2，4-D(4 mg／L)对出愈有抑制作用，同时2，4-D浓度过高(2 mg／L)或过低(0．25 mg／L)都会影响愈伤组织的增殖，并且易使愈伤组织褐化。未经继代的愈伤组织在诱导培养基中可直接分化成苗，其中ZT对成苗的促进作用最强。在含有NAA和细胞分裂素的培养基中，愈伤组织的生长状态良好，均可分化出苗。从而得出结论，当单独使用生长素时，可促使韭菜花序脱分化过程的启动和愈伤组织的形成；当细胞分裂素与生长素配合使用时，可显著增加出愈率和促进愈伤组织细胞的增殖。 ③激素对不定芽分化的影响将韭菜种子萌发10天后长0．5-1．0 cm的根尖接种于附加不同浓度NAA和BA的MS培养基上，3天后从不定芽的分化情况可以看出，NAA和BA对韭菜组织培养的作用显著。在MS+NAA 1 mg／L+BA 2 mg／L培养基上，不定芽诱导频率最高，为80．6％，平均出芽数也最多，达46．5个；MS+NAA 2 mg／L+BA 1 mg／L和MS+NAA 2 mg／L+BA 2 mg／L次之。同时发现易产生愈伤组织的外植体芽分化频率和出芽率均较高。 ④苗龄对不定芽分化的影响随着苗龄的增加，芽分化频率和平均出芽数呈下降趋势；7-10天苗龄的根尖外植体最适于脱分化和再分化，芽分化频率达83．7％-86．4％，平均出芽数达42．2-46．7个，是最适宜的取材苗龄。 ⑤抗生素对植株再生的影响在对卡那霉素(Km)和噻孢霉素(Cef)及Timentin对韭菜组织培养影响的研究中发现问，Km对韭菜植株再生有很强的抑制作用，在Km为20 mg／L时就完全抑制愈伤组织和不定芽的发生；Carb和Cef也抑制韭菜根尖培养的植株再生，其中Cef的抑制作用更加显著，当Carb 500 mg／L或Cef 300 mg／L就完全抑制不定芽的再生；Timentin对愈伤组织和芽的分化影响不大，抑制性主要表现在出芽数随浓度的升高而降低，当Timentin浓度为500 mg／L时，平均出芽数仍可达到23．8个，为对照的49．4％，因而可以选择Timentin作为农杆菌的生长抑制剂。 ⑥温度对生根培养的影响秦波等发现，在其他条件一定时，温度对生根培养影响较大，当温度为(20+2)℃时，组培苗生长健壮；当温度超过30℃时，组培苗生长基本停止，有的甚至死亡；当温度低于15℃时，根系生长良好，但茎叶生长缓慢。因圣堂山野生大叶韭菜生长在大山谷中，喜冷凉的气候，所以得出结论，外植体的培养最好满足其生长环境才能生长良好。

3 问题及展望

随着生理、生化等相关学科的发展，韭菜快速繁殖技术将日趋成熟。对于在愈伤组织培养过程中易产生遗传性变异，特别是染色体倍性的变化，Viterbo等(1992)指出遗传变异是由培养条件引起的，这些变异可用酶的多态性分析，在分化前通过分析酯酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶和过氧化物歧化酶探知，这为预测和预防变异提供了新方法。同时产生较大的遗传变异是选育新品种的基础，因而伴随组织培养技术的日趋完善，可以将植物组培技术与分子生物学方法结合起来，在细胞水平上进行遗传修饰，重组DNA，以改良韭菜品种；也可以与多倍体诱导相结合，从而加速和丰富韭菜的多倍体育种；还可以通过胚培养途径，将诸如山韭具有花期长、抗真菌细菌性病害等的优良性状输入栽培种，以扩大栽培种的基因库。Dommise等(1990)认为与韭菜同属的洋葱是农杆菌的天然寄主，当酚类物质如乙酰丁香酮在农杆菌侵染中的作用被发现后，利用农杆菌介导法将外源基因导入单子叶植物成为可能。目前，我国韭菜的转基因工作也正在进行。随着生物技术产业化发展的日益加快，植物组织培养技术必将会加快韭菜新品种选育的工作进程，并使韭菜组织培养技术尽早地实用化，增强我国加入WTO后韭菜出口的竞争力。

扩展阅读

辣椒疫病防治研究进展

辣椒疫病是由Phytophthora capsici Leon．所引起的一种毁灭性病害，可经雨水、土壤、气流等多种途径传播，除了引起大面积死秧外，还可造成叶片枯萎、果实腐烂、茎秆出现坏死斑，以及整株萎蔫死亡等多种症状。该病于1918年首次在美国新墨西哥洲发现，现已在世界各辣椒产区普遍发生。近年来，国内很多地方都有大面积发生的报道，损失严重，给辣椒生产带来了很大的影响。由于该病原菌的传播途径多样，病害的发生常呈现暴发性，因此单一的防治方法往往达不到应有的效果，须采取多种措施相结合的综合防治策略。

1 选用、培育抗病品种防治辣椒疫病由于辣椒疫病的传播途径多，病原菌的卵孢子在土壤中能长期存活，所以在适宜的温湿度情况下，很容易造成辣椒疫病的暴发流行，使辣椒在短期内大面积枯死。而适宜辣椒生长的季节其温湿度也非常适合于疫霉病菌的生长和繁殖，因此，对辣椒疫病的防治措施中重要的一项工作就是选育抗病品种。1960年Kimble等首次报道辣椒对疫霉菌的抗性，后来研究发现辣椒对疫霉菌的抗性表达受多种因素如温度、水分、接种体浓度、接种时间、接种菌株、接种方法和辣椒生育期等的影响。我国辣椒抗疫病育种研究工作起步较晚，但经过广大科研人员的努力，已建立了一些行之有效的鉴定辣椒抗病品种的方法，并对辣椒抗疫病的机制进行了探讨。黄风莲等研究发现，辣椒抗疫病的性状与植株体内的多酚氧化酶PPO活性、苯丙氨酸裂解酶PAL活性及可溶性蛋白的含量呈正相关，与过氧化物酶POX的活性呈负相关。王兰兰等对16份辣椒材料在6叶期进行苗期人工接种，有3份材料接种后的病情指数低于30，占18，75％，最低的病情指数为22．2，没有高抗品种。刘建华等在1991~1995年间对1 079份辣椒资源进行幼苗6叶期抗性鉴定，以茄门辣椒作感病对照，根据相对抗病性指数(IRR)，得到抗病材料60份，占鉴定资源总数的5．56％，耐病、感病、高度感病的材料分别占27．06％、60．24％、7．14％。国外辣椒抗疫病育种工作取得了较大的成绩，鉴定出的SCM334、Perennial等品种具有较好的抗疫病能力，可以作为抗源材料。但总的说来，辣椒抗疫病材料并不丰富，很多只是中抗或耐病品种，很少有高抗品种，更谈不上有免疫品种。另外，辣椒疫霉病菌有很多不同毒力的菌株，在某地被认为是抗病的品种可能在其它地方又成为感病品种。此外，根据国内外有关学者对辣椒抗疫病遗传机制的研究，发现辣椒抗疫病的遗传规律相当复杂，可以说不同的研究者有不同的结论，有的认为是由单基因控制，有的认为是由寡基因控制，但更多的人认为是由多基因控制的。1999年Walker等研究辣椒对辣椒疫霉菌Phytophthora capsici所引起的根腐和叶片枯萎两种症状的抗性遗传时，用两个感病品种Keystore和Earty Jalaperio分别与抗病品种CM334杂交，得到F1代全部表现为抗病。但来源于Earty Jalaperio的F2代对根腐抗性和叶片枯萎抗性的分离比例均为9：3：3：1(r．r／f．r：r．r／f．s：r．s／f.r：r．s／f．s，下同)，表明有一个独立的显性基因控制根腐抗性，另外还有一个独立的显性基因控制叶片枯萎抗性。而来源于Keystore的F2代对根腐和枯萎的抗性分离比例为7：2：2：5。出现这样的分离比例，作者认为需要有一个显性基因控制根腐抗性，还有一个不同位点的显性基因控制叶片枯萎抗性，另外在这两个基因中至少有一个基因的等位基因作为第3个基因参与根腐和叶片枯萎抗性的表达。 Hwang等研究了辣椒抗疫病与细胞质雄性不育(CMS)和核雄性不育(GMS)的关系，发现用CMS-A与6个抗疫病材料杂交都可育，表明这些抗疫病材料带有恢复基因型N(s) MsMs。

2 利用栽培技术等农业措施防治辣椒疫病防治植物病害的主要任务是营造出有利于植物生长发育而不利于病原物生长发育的环境条件，因此可以采用一些农业防治措施来达到这个目标。

2．1 选择合适的肥料 Forster等在温室中用水培法测定磷酸盐和亚磷酸盐作为磷肥对辣椒生长及辣椒疫病的影响，发现用亚磷酸盐作磷肥时，辣椒植株生长矮小，表现出缺磷的症状，而用磷酸盐作肥料时，植株生长正常且辣椒疫病的发生率要低得多。也有报道施用2％的硅肥和硼肥可提高辣椒的抗病性，而锌肥却没有这种效果。

2．2 选择适当的灌溉方式采用小水沟灌，杜绝大水漫灌，有条件的地方可进行滴灌。Xie等报道1995-1996年在新墨西哥州测定每天滴灌、每3d(天)滴灌和沿沟漫灌3种方式对辣椒品种Newner06-4产量和疫病的影响，发现每天滴灌可以使土壤的湿度适合于辣椒生长而不适合于疫病的发生。

2．3 改进栽培措施高畦深沟地膜覆盖栽培，北方地区可采用与小麦套作和玉米间作方式，深施有机农家肥。吕和平等经多年调查发现，起垄覆膜栽培、轮作倒茬、合理套作、浅灌控水等措施对防治辣椒疫病有明显的控制作用，在重病区采取这些措施可使病株率降低73．9％，产量提高13％。

2．4 采用嫁接方法程子林等从10余个辣椒、茄子等材料中筛选出3个对辣椒疫病菌有较强抗性的品种作为砧木，采用靠接、劈接等方法，嫁接成活率达90％-98．7％，防效达95．3％~96％，可增产23％~25％，且辣椒果实外观无明显变化。不过，可能由于商业秘密方面的原因，该文并没有报道用作砧木的品种名称。

2．5 运用生态学方法 Ristaino等认为以生态为基础的有害生物管理(ecologically based pest management，EBPM)策略是防治有害生物最安全、最易操作和可持续发展的一种方法，提出可以从选择适宜的种植地、适时移栽、合理灌溉、注意轮作、及时晒地和补充有机肥、精选抗病品种等诸多方面防治辣椒疫病的发生和为害。

3 化学药剂防治辣椒疫病由于辣椒疫病的病原菌可在土壤中长期存活，因此辣椒疫病的发生主要与气候、品种抗病性等关系较为密切。病害发生多从侵染根部开始，当地上部分表现症状时，再用化学药剂进行防治可能达不到应有的效果。因此用化学方法防治辣椒疫病也要系统用药，不要等疫病大面积发生才开始用药。具体来说在辣椒育苗时，结合防治苗期的猝倒病、根腐病等病害，喷施1~2次800倍液58％甲霜锰锌可湿性粉剂或1 000倍69％安克锰锌可湿性粉剂；定植后，可用35％霜霉威水剂300倍液、58％甲霜锰锌可湿性粉剂500倍液、80％乙磷铝可湿性粉剂400倍液、69％安克锰锌可湿性粉剂1 000倍液灌根；始花期，每隔10d(天)左右，用58％甲霜锰锌可湿性粉剂500倍液、72％克露可湿性粉剂400倍液、69％安克锰锌可湿性粉剂1 000倍液灌根，连续4-5次，也可进行喷雾，但重点应喷施到根部和茎基部才能有较好的效果。现有的防治疫病的主要药剂甲霜灵、霜脲氰、乙磷铝等内吸性杀菌剂属于特异性位点抑制剂，对病原菌的作用位点单一，只对病原菌的单一代谢环节起作用，一旦此位点发生突变，药剂即不能与其产生作用，从而导致病菌产生抗药性。因此监测疫霉病菌对甲霜灵、乙磷铝等药剂的抗性及了解病菌的抗性遗传特点、筛选新的药剂成为化学防治疫病的主要目标。罗赫荣等研究发现辣椒疫霉对甲霜灵的抗性由不完全显性基因控制，对霜脲氰的抗性由完全显性基因控制，二者不存在连锁遗传关系，因此可轮用或混用这两种药剂来防治辣椒疫病。目前发现的野生辣椒疫霉菌株已有55．6％存在抗药性，甲霜灵与恶唑烷酮、甲呋酰胺间存在交互抗性，与霜霉威间没有交互抗性。Pennisi等1998年报道从意大利南部地区分离到60个辣椒疫霉病菌菌株，体外测定对杀菌剂甲霜灵的敏感性，筛选到一些不敏感的菌株。由于现有防治辣椒疫病的主要化学药剂都存在被病原菌克服毒性的可能，因此筛选新的对辣椒疫霉有效的药剂成为一种要求。目前已发现有许多化学物质如碳酸氢钠、氯化钠、硫酸钙、氯化钙等对疫霉菌的生长和病害的发展都有刺激作用，杨君丽在室内测定了3种杀菌剂对辣椒疫病的抑制作用，发现克露(美国杜邦公司生产)的抑菌能力最强，速克灵(日本住友公司生产)次之，利得最弱。Neshev对不同辣椒品种Kurtovska kapiya 1969、Kalinkov 800／7、Albena、Sofia's　kapiya、Bucketen进行人工接种，苗期喷施辣椒疫霉菌游动孢子104个/mL。移栽50-60d(天)开始处理，用不同药剂Ambis和Ridomil防治辣椒疫病，然后每15d(天)记载发病率、茎高和产量，发现只有Ambis效果最好，施药1个月后辣椒疫病的发生率仅2／150，产量也最高。ethaboxam是韩国开发的第一个拥有自主知识产权的杀菌剂，于1998年登记，Kim等测定了这种新杀菌剂对黄瓜霜霉病、马铃薯晚疫病和辣椒疫病的防治效果，发现均能控制病害的发生，且优于对照药剂甲霜灵。杨宇红等通过室内和田间试验，筛选出辣椒重茬剂A，对辣椒疫病、白绢病的防效达86．3％，增产25％以上。

4 利用生物技术方法防治辣椒疫病

4．1 筛选拮抗微生物来防治辣椒疫病从不同生态、植被的土壤中采集样品，筛选拮抗微生物，朱宗源等发现在测定的7425株菌株中，有347株菌株对P. capsici有较好的抑制作用，其中细菌15株，真菌15株，放线菌317株，其中防疫I号和防疫Ⅱ号对辣椒疫病的相对防效分别为80％和60％，更有意义的是防疫I号和防疫Ⅱ号还能促进辣椒植株生长，增加鲜质量，发现防疫工号在土壤中有较强的生存能力。Jubina等从印度不同黑辣椒(Piper nigrmn)产区分离根际细菌进行体内外生物防治试验，发现在194个菌株中，有8个在室内可减少辣椒疫霉病菌孢子的产生，田间试验表明这些根际细菌能有效地控制病害，死亡率为43．5％，而对照为100％，有3种菌株施用90d(天)后还有很好的效果。有人从拮抗菌Pseudomonas aeruginosa B5中提取一种醣酯类抗生素rhamnolipid，室内测定表明该物质在10g/mL时可抑制疫霉菌(Phytophthora capsici)、尾孢霉(Cercospora　kikuchii)、枝孢霉(Cladosporium cucumerinum)、炭疽菌(Colletotrichum orbicular)、稻瘟菌(Magnporthe grisea)的生长，显微镜检查发现辣椒疫霉的游动孢子出现裂解，在25g/mL，时可抑制游动孢子萌发，50g/mL时可抑制菌丝生长。另外，从一串红植物根际分离到Serratia marcescens，发现该菌能产生抗生素，对疫霉菌有较强的抑制作用，并利用转座子插入技术诱导该菌发生突变，再通过乙醇、氯仿、硅胶柱层析等步骤将其代谢物纯化，得到灵菌红素(prodigisin)，该物质能抑制疫霉休眠孢子的萌发和菌丝的生长。Lee等在室内单独用诱抗剂-氨基丁酸(DL--ammino-n-butyricacid，BABA)1 000g/mL或联合根际细菌BurkhoMeria cepacia N9523菌株，对辣椒疫病均有很好的防效，BABA在田间也有良好的作用。然而单独用Burkholderia cepacia或联合BABA在田间无明显作用。用拮抗菌Pseudomonas aeruginosa)菌株950923-29联合BABA在田间有良好的作用，单独用二者效果更加好。哈茨木霉Trichoderma harzianum抓在控制辣椒疫病上也有显著的作用。

4．2 利用生物诱导辣椒抗病性 Lee等先接种TMV辣椒菌株，再接种辣椒疫霉的游动孢子，发现辣椒疫病的严重度和病斑均小于对照，从接种叶片中分离到PRl和PR5蛋白，表明接种TMV后诱发辣椒产生系统获得抗性(system acquired resistance，SAR)。用辣椒疫霉菌的冻干菌丝和培养滤液激发抗病品种Smith-5、感病品种Americano和Yolo Wonder的反应，发现它们的电导率发生改变、出现褐变现象以及产生辣椒素和积累病程相关蛋白如葡聚糖酶(EC3．2．1．39)和几丁质酶(EC3．2．1．14)，但抗病品种表现出比感病品种的应急反应更快，用冻干菌丝接种后18小时辣椒素积累最快，用培养滤液接种后12h(小时)辣椒素积累最快。发现从疫霉属的4个不同种中分离出4种激发子(elicitin)：cactorein、 eapsicein、parasiticein和coyptogcein，能激发植株的防御反应。Nespoulous等通过层析和电泳技术从辣椒疫霉Phytophthora capsici的培养滤液中分离出具有高磷酸酯酶B活性的两个同功酶，分子量分别是X和32Kd，与辣椒疫霉Phytophthora capsici的激发子capsicein有很高的同源性。

4．3 利用基因工程技术防治辣椒疫病由于辣椒对疫病的抗性是由多基因控制的，因此分离和克隆抗病基因相当困难。但可以将广谱抗真菌基因转化到辣椒植株上，也会得到较好的效果。Sripmsertsak在1999年报道将苯丙氨酸氨基裂解酶基因与编码GUS的报告基因构建一个融合质粒，并用农杆菌介导的叶盘法转化到烟草植株，通过接种致病菌和非致病菌来检测成熟叶片中PSPAL2启动子中GUS的表达情况，用非致病菌Phytophthora capsici接种能检测到过敏性反应HR周围叶片中有GUS表达，尤其是在PSPAL2-FL和PSPAL2-FLdl的转化植株中表达更强烈。

5 今后的发展方向由于化学药剂对环境污染以及生物多样性的影响，防治植物病害最有效的方法是利用抗病品种，同时给植物一个健康向上的生长环境，即植物健康管理(plant health management，PHM)。植物健康管理比有害生物综合治理(integrated pest management，IPM)的提法年轻，同时PHM建立在IPM基础之上且包括IPM，但不能取代IPM。当今，倡导科技以人为本，在植物种植过程中，是否也可提出以植物为中心的策略来防治植物病虫害呢?答案是肯定的。因此，防治辣椒疫病的关键是提高辣椒的抗病性。可以从三个方面着手：从辣椒栽培品种或野生品种中筛选出高抗的品种；从烟草、黄瓜等其它植物中筛选出对疫霉菌具有高抗或免疫的品种；从微生物中筛选能降解疫霉菌毒素的物种，然后通过品种杂交或基因工程技术将抗病基因或抑菌基因转移到农艺性状优良的辣椒品种中，得到新的抗病品种。其次，充分利用植物资源，从植物中筛选出对病原菌有强烈抑制或杀伤作用的物质，达到人与自然的和谐。

秋水仙碱在油菜小孢子培养中的应用研究进展

小孢子培养技术是大量获得单倍体的主要途径，目前已广泛应用于油菜等作物的遗传育种及转基因研究。通过小孢子培养获得的再生植株单倍体频率高，而单倍体往往不能被直接利用，需对其染色体进行加倍处理，使之成为可育的双单倍体(DH)植株。经国内外10多年来的努力，小孢子培养染色体加倍技术得到了迅速发展，可从早期分离的小孢子到后期大植株等不同时期进行染色体加倍处理，并逐渐发展形成了一套高效、安全、低毒的操作技术体系，其中秋水仙碱作为最实用、有效的加倍药剂而被广泛使用。秋水仙碱(C22H25NO6)为水溶性生物碱，剧毒，分子量399.4，能抑制有丝分裂纺锤体的形成，主要影响染色体的配对，特别是作用于核膜中与秋水仙碱结合成分。秋水仙碱也作用于微管蛋白，能阻断微管蛋白聚合成微管。秋水仙碱是一种细胞分裂完全抑制剂，即可捕获分裂中期的染色质，阻止其进入分裂后期。目前我国在油菜小孢子培养方面的研究发展较快，在小孢子培养技术实际应用中，如何提高秋水仙碱的加倍效率、减少污染、降低生产成本等方面显得十分重要；其次，秋水仙碱所衍生的其它功能，如提高小孢子出胚产量、胁迫诱导出胚等也很有意义，而国内在这方面的研究相对较少。

1 染色体加倍技术研究

1.1 开花前处理 Polsoni等把处于初花期的单倍体植株从土壤中取出，洗根和切根后，用1g／L秋水仙碱水溶液在阳光下浸根5h，处理后再移植土中。Chen等在现蕾一初花前后用2g/L秋水仙碱浸根6-8h，获得53％的平均加倍率。Fletcher等认为，开花前用秋水仙碱加倍染色体有一些优点，如花前小孢子植株的单、二倍体易于区分；花前植株生长速度快，秋水仙碱通过根系吸收的效率最高。Fletcher等用3.4g/L秋水仙碱水溶液浸根或植株，在强光下处理1.5h，然后用自来水冲洗处理部位，再移人土中，处理植株存活率为96％,加倍频率为90％-96％。这种方法较适宜于无倍性检测仪器条件下应用，简单有效，但存在一些问题，如开花前处理的植株较大，存活率受影响，生长发育及其进程受抑，操作不便；使用的秋水仙碱浓度较高，产生待处置的废液多，费时费工。

1.2 土壤小植株处理 Lichter等对移到土中小植株的次生芽采用注入2g/L秋水仙碱的方法加倍染色体。Charne等和Swanson等取已入土的小植株浸根，用1-2g/L的秋水仙碱溶液(加2滴Tween-20可提高秋水仙碱效果)处理5-6h。Fletcher等将开花前处理加倍方法也用于较大植株的处理，即用3.4g/L的秋水仙碱浸根处理1.5h。Zhou等对2个F1代的单倍体再生植株用125mg/L秋水仙碱液浸根20h，加倍率分别为52％和56％；2周后对逃逸的单倍体再用3.4 g/L秋水仙碱浸根1.5h，以确保其加倍率。用此方法处理小植株必须事先已测定过其倍性，缺乏倍性检验仪条件则难以实行，因为此时单倍体与二倍体小植株在外观上难以区分。其次操作也较为复杂，要经历从洗根、浸根、再洗根到人土等多项步骤，较为费时费工，小植株也有一定损伤。此外，应用此方法对染色体加倍不完全，会产生较多单倍体与二倍体等的倍性嵌合体。

1.3 试管苗处理针对土壤小植株用秋水仙碱处理费时的问题，Mathias等提出用试管苗进行直接处理，把3～4叶龄的带根再生小植株移人含50mg／L秋水仙碱的B5培养基中培养4-8d，再移至不含秋水仙碱培养基中无菌培养1-2周，其加倍频率超过50％。以试管苗作早期处理有利于整个植株的二倍化，处理植株的生长不受抑制；处理植株的花期早于非试管苗处理；所用秋水仙碱浓度低、数量少，因而可降低毒性和成本。此外，在双单倍体的生产中，对刚出管的小植株，Burnett等用1-2g/L秋水仙碱浸根2-4h，Ferrie等用3.4g／L秋水仙碱浸根1.5h，Guo等用2g/L秋水仙碱浸根2h，然后洗净后移入土中。试管苗加倍方法比前述方法省力，但在实际操作中存在两方面的问题，一是处理植株未进行倍性检测，会使部分自然加倍的二倍体再次加倍，成为多倍体或二倍体的嵌合体；二是试管小植株的倍性极不稳定，我们发现秋水仙碱处理过的小植株在移人土壤后其倍性会发生变化。

1.4 胚体处理 Chen等在光照下用1-2g／L秋水仙碱对15-20d的胚处理8-20h，二倍体发生频率15％-34％。Zhou等对移人固体培养前的5周龄胚状体用含25～50mg／L秋水仙碱液体培养15-30h，其二倍体植株频率为41.7％～44.7％。此法加倍效果较差，而且产生嵌合体和多倍体频率相对较高。另外，对2周龄大小的胚体(肉眼刚可见)在培养基中加入适量的秋水仙碱，振荡培养72h，也有一定的加倍效果。 1.5 小孢子处理近几年来，直接用秋水仙碱处理刚分离小孢子以提高二倍体频率作了较多研究。Chen等在多个基因型中用0.5～1.0g/L秋水仙碱处理刚分离的小孢子8～20h，获得了37％～93％的二倍体加倍频率，平均加倍率达70％。MOiler等用50mg/L秋水仙碱处理24h后得到80％～90％的二倍体胚体，用较低浓度(10mg/L)秋水仙碱处理72h，二倍体胚体达80％，其再生的植株与正常的二倍体植株无差异。Zhao等用10mg／L秋水仙碱直接处理小孢子18h，获得22％的可育株，秋水仙碱连续培养的可育株为53％，而对照只有12％。但是不更换培养基会造成大量的畸形胚产生，转移到固体培养基后这些胚再生成小植株的比率会明显降低。Zhao等用10mg/L秋水仙碱处理42h后，再稀释至5mg/L培养，获得了90％的可育株。Hansen等比较秋水仙碱与其它解微管除草剂直接处理小孢子的加倍效果，发现用秋水仙碱400mg／L处理24h所得可育植株(二倍体)达94％，处理时间和浓度对染色体加倍具有极显著效应。Zhou等用50mg/L和500mg/L秋水仙碱处理15h，获得大量正常胚体，加倍频率达到75％～92％，且嵌合体和多倍体很少。研究表明利用分离小孢子直接进行秋水仙碱加倍染色体更为有效、完全和快速。

2 提高出胚产量 Zaki等研究了秋水仙碱直接处理小孢子对球形胚和子叶胚产量的影响，结果表明用秋水仙碱25mg/L处理12h能显著提高胚产量，长时间及高浓度处理会抑制胚产量，研究认为秋水仙碱作用于花粉第1次有丝分裂前期，促进了小孢子对等分裂数量，激活小孢子从配子体向孢子体发育。秋水仙碱直接处理小孢子对于小孢子反应差的基因型提高出胚潜力优于反应好的基因型。Iqbal等用秋水仙碱直接处理分离小孢子也得到类似结果，在57个试验中有69％的试验结果表明能提高出胚产量，最佳处理组合为100mg/L秋水仙碱培养24h，出胚数量比平均胚产量高出3倍；其次，长时间低浓度处理组合(10mg/L 72h)也有较好的效果，比平均胚产量高出1.8倍。但处理时间过长会产生不正常胚，对小植株的再生也有负面影响，10～20mg/L秋水仙碱处理18h未能提高小孢子的出胚频率。Hansen等分析了秋水仙碱直接处理分离小孢子的浓度与时间组合，表明不同浓度和时间对胚产量有极显著影响。中等浓度(1.2-40mg/L)能略微提高胚产量，当浓度高于120mg／L时对出胚有负作用，处理时间以12h为最好。Zhou等进一步证实了秋水仙碱直接处理小孢子对出胚产量提高的作用，用500mg/L秋水仙碱处理多个基因型15h，正常胚产量最高，比不处理对照提高70％-84％，萌发胚率也有显著提高。

3 诱导出胚研究目前油菜小孢子培养技术体系中，小孢子常需30-33℃高温热击1-7d方能诱导出正常胚体。ZhaoL291提出了用秋水仙碱替代高温热击诱导小孢子出胚的新途径，这对研究小孢子的出胚机理具有重要意义。诱导方法是在25cC培养条件下先用秋水仙碱10mg／L直接处理刚分离的小孢子42h，而后将秋水仙碱浓度稀释至5mg／L直至培养出胚，小孢子胚发生频率占所培养小孢子数量的15％以上，经秋水仙碱诱导出胚的再生植株的二倍体率为90％，而热击诱导只有6％。由于经秋水仙碱处理的小孢子中热击蛋白HSPsl9和HSPs70均未被检出，据此Zhao假设HSPs不是小孢子诱导出胚的必要条件，HSPs的产生仅仅是细胞对高温的响应结果，它的作用可能是小孢子的存活和修复，而不是诱导出胚；进而假设花粉基因表达的抑制和结构重组是诱导小孢子出胚的真正机理。但有趣的是，以上推测与近来Srnykal等的试验结果不同。Smykal等人采用类似Zhao的方法，在20℃下用秋水仙碱诱导出胚，结果表明秋水仙碱直接处理小孢子诱导出胚率为2.3％，远远低于高温热击8.6％的出胚率，并检测出小热击蛋白sHSPsl7.6。通过非生物胁迫(如秋水仙碱)诱导小热击蛋白表达，是小孢子培养出胚的必要条件，但非充分条件。周伟军等采用秋水仙碱与高温热击处理甘蓝型冬油菜F1杂种分离小孢子，获得了较高的出胚率和成苗率，即直接用500mg／L秋水仙碱对分离小孢子处理15h，并于32℃和30℃分别热击暗培养3d和7d后转入24℃下培养，胚胎发生良好，5周后产生大量正常胚体，将这些发育优异的胚体移人固体MS培养基后即进行10d低温(2℃)诱导，随后在常温(24℃)光照培养条件下能很好地萌发并直接、快速地再生成植株，其萌发胚率为89％和87％，成苗率为63％和55％。

4 展望

综上所述，秋水仙碱直接处理小孢子的加倍技术具有操作方便、省工省时、加倍效率高、废液少、嵌合体和多倍体比例低等优点，尤其适用于不具备多倍体检测设备的实验室应用，是油菜小孢子培养中一种最具应用前景的染色体加倍方法。但从有关文献和我们的实验中发现，秋水仙碱直接处理小孢子仍不能完全克服由于供体基因型等遗传差异性引起的某些材料的小孢子培养低反应问题，或表现对提高出胚及加倍效率不稳定等。因而较理想的稳妥加倍办法是前期秋水仙碱直接处理分离小孢子与后期花前植株处理相结合。此外，探索更为易行、安全、高效的加倍途径，如更低浓度、更低剂量、更高效率的替代方法也很有意义。对此，我们设想并已尝试对未分离小孢子进行某些预处理，发现在预处理时或预处理后能进一步提高出胚产量及加倍频率；同时应寻找具有更高加倍效率而低毒性的秋水仙碱替代物，以更好地用于遗传研究及育种实践。由于非生物胁迫的秋水仙碱处理能诱导小孢子出胚，这对研究目前尚未清楚的小孢子培养出胚机理具有非常重要的意义。秋水仙碱能促进小孢子对等分裂，替代高温热击诱导出胚，秋水仙碱是否在油菜小孢子培养中还存在其它潜在功能?如调节培养液的渗透压、诱导性状变异和种质材料创新等等，这些研究有待进一步试验探索。

蔬菜作物多倍体育种研究进展

据统计，自然界中30％-35％的被子植物，70％的禾本科植物属于多倍体，它们是推动植物进化的一个重要因素，是物种形成的途径之一。目前农业生产上广泛栽培的小麦(异源六倍体)、大豆(异源四倍体)、花生(异源四倍体)等重要作物，都是多倍体育种的杰作。而以营养器官或多汁多肉果实供食的蔬菜作物，通过利用多倍体的巨大性，更具特殊意义，是蔬菜优质高产育种的重要途径之一。自1937年勃莱克斯利(Blakeslee)和艾弗瑞(Avery)发现秋水仙素(Colchicine)诱导染色体加倍的效果以后，掀起了用秋水仙素诱变多倍体育种的热潮。1937年也被称为多倍体新时代的开始。现已经在1 000多个植物种中获得了人工多倍体。蔬菜作物多倍体的栽培利用是以四倍体和三倍体为主，到目前为止，人工诱导获得多倍体的蔬菜作物有：西瓜、甜瓜、黄瓜、番茄、马铃薯、不结球白菜、花椰菜、芹菜、萝卜、莴苣、菠菜、辣椒、大白菜、丝瓜、石刁柏、生姜、茄子、黄花菜、菜薹、莳菜等，但在生产上大量推广应用的只有西瓜、白菜、马铃薯等。

1 蔬菜多倍体的获得途径研究

1．1 自然突变产生多倍体一些自然现象如雷电、空气、温度剧变致使植株创伤等有时能诱发四倍体。自然界四倍体形成主要有两条途径：其一是原种或杂种所形成的未减数的配子的受精结合；其二是原种或杂种的合子的染色体加倍。关于自然出现四倍体的频率，多年生植物高于一年生植物，因为多年生植物开花结实的机会更多；白花授粉植物出现多倍体的频率高于异花授粉植物，因异花授粉植物与它株(二倍体)授粉产生三倍体种子而绝种。此外能够自己进行无性繁殖的植物同源四倍体出现的频率高于有性繁殖植物，因此大部分蔬菜作物的四倍体自发突变频率较低。Nugent和Ray从栽培二倍体甜瓜品种'Planters Jumbo'中田间发现了自然突变C899-J2后绿标志的四倍体甜瓜品系，用此四倍体做母本生产出无籽甜瓜。

1．2 人工整体植株诱导获得四倍体利用一定的物理和化学的方法可以进行四倍体的人工诱发。最早诱发的四倍体是在番茄上通过打顶等机械损伤方法而实现的。利用化学方法诱导主要利用化学试剂如秋水仙素、苯乙烷、吲哚乙酸、苯及其衍生物、有机砷制剂、有机汞制剂、磺胺剂及其他植物碱。人们主要用秋水仙素诱导植物生长点的办法获得同源四倍体。通过此方法，目前在瓜类、茄果类、根菜类、叶菜类、花菜类等方面都通过此途径获得同源四倍体、三倍体品系。

1．3 通过离体组织培养获得四倍体随着植物组织培养技术的发展，染色体加倍可通过离体组织培养获得多倍体。通过离体培养获得四倍体可以提高再生植株群体中四倍体的频率，并容易控制实验条件，减少或避免异倍性嵌和体。离体组织细胞染色体加倍有以下途径。 ①利用植物组织培养过程中出现四倍体无性系变异获得四倍体再生植株。Adelberg、Rhodes，Ezura等、Zhang等、马国斌等、何欢乐等用西瓜和甜瓜的未成熟子叶、子叶和真叶作为外植体进行离体培养，利用诱导再生植株过程中发生染色体数目变异，获得了较高频率的四倍体变异。Kunitake等报道石刁柏和胡萝卜的组织培养过程很容易产生四倍体。袁华玲等就利用组织培养获得四倍体石刁柏试管苗。郭启高等在西瓜芽再生培养基中仅添加BA，即可产生高频率的四倍体变异。 ②在培养过程中，用秋水仙素溶液处理培养材料。周朴华等在黄花菜组织培养中，用秋水仙素溶液处理愈伤组织，获得同源四倍体黄花菜新品系。张建军等对于叶菜类的白菜和莴苣，用含秋水仙素的固体培养基处理带3-4片真叶的再生苗，再从中诱导出相应的四倍体。马国斌等对8天左右苗龄的茎尖，在含有0．1％秋水仙素和较低浓度细胞分裂素的液体培养基中处理24-48 h，很好地诱导出四倍体。此外还发现几种除草剂(Trifluralin，Oryzalin等)也具染色体加倍的功能，甚至效果更好。

1．4 有性杂交培育多倍体指原种或杂种所形成的未减数配子的产生和融合(有性多倍化sexnal polyploidization)。未减数配子即2n配子，它是染色体数目和体细胞相同的花粉或卵。通过单向多倍化(双亲之一为产生2n配子的类型)或双向多倍化(双亲均能产生2n配子)均能提高杂交后代的倍性水平。王子欣报道以秋水仙素处理诱发产生的结球白菜四倍体为母本与二倍体结球白菜杂交，获得了新的同源四倍体。新四倍体的获得是二倍体未减数配子(2n配子)与四倍体的正常2n配子受精结合的产物。这种方法，很可能是改良人工诱发的四倍体的一条有希望的途径。利用2n配子可便利地转移抗性基因。马铃薯细菌性萎蔫病是发生在湿热条件下的严重病害，四倍体栽培种的抗性较弱。Watanabe等(1992)用抗病的二倍体与感病的四倍体杂交，获得了抗病的四倍体后代。通过2n配子，在二倍体水平上杂交，可直接获得三倍体而不需四倍体亲奉。

2 蔬菜多倍体植株的形态特征研究当染色体组成倍增加之后，其细胞核与细胞质的比例关系发生变化，各染色体在减数分裂过程中有可能发生不均衡分配、基因的剂量效应和基因的互作效应等都会破坏原有的生理生化功能的平衡，致使植株发生一系列变化。

2．1 多倍体檀株性状的巨大性染色体的同源倍数越多，细胞核和细胞的体积越大，叶片大小、厚度、气孔和花粉粒大小、花和种子大小、茎的粗度也随之递增，这种特征称为多倍体的巨大性。多倍体植物的巨大性不是绝对的，不同倍性不同器官表现不同。如柴兴容等等通过秋水仙素诱导甜瓜植株获得的各种甜瓜四倍体，薄皮甜瓜、厚皮甜瓜、哈密瓜等的四倍体，果实反而比二倍体变小，长形和大型果实变小程度更加明显；果肉增厚，种腔变小；其他植株性状仍然呈巨大性。

2．2 多倍体檀株的生长发育一般比二倍体慢开花且成熟较迟，分枝能力减弱，但适应性增强。生长发育缓慢与细胞分裂缓慢有关，生长素含量少也是重要因素，此外，因细胞体积增大，细胞的表面积与体积之比相对减少，从而引起一系列的代谢过程，如呼吸强度、蒸腾作用降低，使发育延缓。刘文革等测定西瓜四倍体的植株叶片的单位重量光合色素含量比相应的二倍体低，但叶比重、叶片叶面积、单位叶面积上的光合色素含量是随着染色体倍性的增加而增加。近年来随着转基因研究和对基因互作的深入研究提出了基因沉默和共抑制假说，从另外一个角度解释了植物的性状并不一定随着倍性的增加而增大的原因。

2．3 同源四倍体的低稔性和同源三倍体的不育性李爱华等对同源四倍体的黄花菜的减数分裂行为及其育性的研究得出，减数分裂的不正常，形成配子的染色体数目不平衡，是造成部分不育的细胞学原因。Quadt等对番茄四倍体研究发现细胞增大和稔性降低间的相关，稔性和染色体配对情况也无明显相关，认为稔性主要受基因型控制。邹道谦等认为四倍体番茄稔性低的主要原因是胚珠受精率低。谭素英等以西瓜四倍体和二倍体为试材，从授粉、受精和胚胎发育的角度进行研究得出，花粉萌发率低、胚囊受精率低、胚乳过早解体、大多数胚在发育过程中败育，是同源四倍体西瓜低稔性的胚胎学原因，孕性也受环境因素的限制。同源三倍体的无籽西瓜和自然形成的三倍体香蕉和黄花菜，一般是高度不育的，没有种子。有些作物4X和2X杂交，得不到成熟的3X种子。刘学岷等、胡金良等对4X和2X的小白菜的胚胎学研究表明，4X和2X的受精和早期胚胎发育正常，由于胚乳过早解体，胚发育到球形原胚时发生退化，因而无法获得成熟的3X种子。Malepszy等对黄瓜的研究，由于4X和2X的正反交无法得到成熟种子，就通过对其进行胚挽救，得到3X植株，但正反交得到的3X植株特征并不一样。Ezura等通过胚挽救获得三倍体甜瓜。张成合等队为引起异倍体间杂交不稔的原因主要是胚胎在发育过程中发生败育，胚乳提前退化。

2．4 生物化学和次生代谢成分增加由于生长缓慢，代谢强度改变，多倍体的化学成分，如氮、碳水化合物、维生素、植物碱含量增加。例如，一些药用植物如罂粟的多倍体所含的吗啡比二倍体多。三倍体的西瓜和甜瓜的含糖量、四倍体番茄和甘蓝的Vc含量比相应的二倍体含量高。刘选明等对获得的同源四倍体黄花菜进行分析得出，四倍体的蛋白质含量、总糖含量等比相应的二倍体大幅度提高。

2．5 多倍体植株的抗逆性许多研究表明，植物多倍体的抗逆性比相应的二倍体高。三倍体和四倍体西瓜对枯萎病有较强的抗性，可连种多茬。四倍体的萝卜对普通根肿病的抗性比二倍体高。张建军等对莳莱四倍体的抗热性研究表明．植株的巨型性是耐热四倍体增产的主要因素。刘惠吉等对不同倍性不结球白菜的体细胞质壁分离状况研究表明，四倍体白菜细胞的原生质水合度变化小，粘滞性强，因而受逆境的胁迫变化小，从而导致抗性增强。刘文革等用NaCl琼脂固定法对蜜枚西瓜的二倍体、三倍体、四倍体在不同浓度。NaCl胁迫下发芽种子成苗率、下胚轴长、根长、侧根数等比较，当NaCl浓度在90 mmol／L以上时，不同倍性之间有明显差异，四倍体耐盐性明显比二倍体强。

2．6 产生多倍体优势的内在原因 ①重复基因的剂量效应。由于不同染色体组之间往往具有一定的同源性，这就使得一些具有相同功能的基因产生剂量效应，由此表现出优于亲本的优势。 ②基因的遮盖作用或上位效应。由于不同染色体上的同功基因在表达上是一致的，其中如有一不良基因也会因其它基因的遮盖而对整体表现难以产生大的影响，使机体能正常的生长。 ③重复基因的显性与超显性作用。位于不同染色体组上控制同一性状的基因可以与同源染色体上的等位基因一样产生显性与超显性作用。 ④等位基因间的互作。由于多倍体中不同染色体组上重复基因的相互影响，同源染色体上等位基因的杂合性可以在选择中得到长期保持。 ⑤非等位基因的互作。一般而言，一个性状往往是由不同的代谢途径控制的。多倍体的遗传体系较为复杂，这种情况就更容易出现。如果一个染色体组上控制某一性状的基因表达受阻，不仅同一组内的非等位基因可以补替，其他染色体组的基因也会补替而使性状得以表达。

3 蔬菜多倍体研究的应用多倍体育种在蔬菜上的应用已有70多年，科学家们培育出很多种类和类型的多倍体蔬菜品种，蔬菜作物多倍体能提供人们比二倍体更多或更优良的水果、蔬菜类型。

3．1 利用多倍体的巨大性获得大的果实或营养器官产品，使蔬菜作物增产日本于20世纪40年代育成的四倍体美浓早生萝卜，性耐寒，生长旺，肉质根长而大，呈白色，多汁味甜，生食或熟食，产量提高20％左右，抽薹晚。在瑞典，芜菁已经用四倍体品系来加以改良。刘惠吉等选育第一个不结球白菜四倍体品种南农矮脚黄小白菜四倍体品种，其表现比二倍体，叶色变深，叶片变厚增大。其产量较二倍体增加20％-30％。抗逆性明显提高，已大面积应用于生产。在60年代末和70年代初，前苏联和日本诱导出的同源四倍体南瓜(包括中国南瓜、两葫芦和笋瓜)，它们的产量明显超过二倍体，增幅达105％~300％。

3．2 利用多倍体可孕性低来获得无籽或少籽的果实无核果实在商业上具有特别的价值，三倍体无籽西瓜是目前在生产上利用同源多倍体面积最大的植物品种之-。三倍体无籽西瓜是三倍体水平的杂交一代西瓜，具有多倍体和杂交一代的双重优势，其适应性和抗逆性更强，含糖量高，无籽，耐贮运，产量高，深受消费者和种植者欢迎。蜜枚无籽一号、黑蜜无籽二号、郑抗无籽、雪峰无籽、洞庭无籽等已经成为我国西瓜的主栽品种。其他瓜类的三倍体无籽植株也已获得，但还没有在生产上应用。李树贤等选育的同源四倍体茄子品种新茄一号，其平均单果种子数324粒，仅为二倍体品种六叶茄的9．5％，为少籽高营养品种。

3．3 利用多倍体营养成分和品质的提高，成为蔬菜优质育种的主要途径之一刘惠吉等培育的四倍体不结球白菜南农矮脚黄，Vc增加30％，还原糖增加24％，粗纤维却减少12．7％。氨基酸总量增加4．14％，Ca、P、Fe三种矿质元素的含量成倍或数倍增加。综合品质为嫩、鲜、甜。瓜类蔬菜四倍体的可溶性固形物含量一般较二倍体高10％~30％。同源四倍体茄子品种新茄一号的果实Vc、脂肪、蛋白质含量分别较对照二倍体品种增加了74．38％，31．30％和34．22％。

3．4 利用多倍体蔬菜抗逆性强，扩大栽植区域和栽植周期在长江流域，夏季炎热，主要叶菜类蔬菜由于抗性较差，在夏季经常出现短缺，刘惠吉等利用四倍体抗逆性，选育出一系列的抗热白菜四倍体品种，如南农矮脚黄、热优二号等，由于抗病性、抗热性品质明显优于二倍体，正好弥补了叶菜夏淡状况，'寒优一号'又适合冬季栽培，这些品种很快得到推广，目前栽培面积已超过20万公倾。在南方种二倍体西瓜，遇到雨季，容易生病烂果，常给瓜农造成很大损失，三倍体无籽西瓜由于抗病耐湿耐热，在南方很快得到推广。

3．5 利用染色体多倍体化克服远缘杂交不孕不实性利用多倍体做亲本，高染色体倍数水平有利于远缘杂交。例如甘蓝和野油菜作为二倍体相互不能杂交，但是，作为诱导成四倍体后可杂交。K．Szteyn(1959)报道秘鲁番茄和多腺番茄杂交中，如将母本植株先诱导成同源四倍体，结籽率比以二倍体为母本的增加80倍。

3．6 利用染色体加倍人工创造新的作物类型 Karpechenk等进行了萝卜与甘蓝不同属间的杂交，由杂种的染色体加倍而育成了异源多倍体萝卜甘蓝，论证了人丁创造新种的可能。日本园艺试验场在60年代育成了大白菜与甘蓝的远缘杂交新人工合成种白蓝，它是采用有性杂交后的杂种胚再进行染色体加倍的，是异源四倍体。其品质和风味与莴苣相似，多汁味甜，可做生食、腌渍、榨汁等利用，另外对软腐病的抗性超过双亲。目前，白蓝已在日本的东海地区已有所栽培。但自然形成的异源多倍体的蔬菜很少，如芥菜、欧洲油菜等。

3．7 利用多倍体可以创造非整倍体，如三体、单体添加系等 Bemis通过对南瓜的栽培种和野生种的加倍、杂交、回交创造所需的三体。Struss等用黑芥(BB)、芥菜(AABB)、阿比西尼亚芥(BBCC)等不同来源的Brassica属的种间杂种的B染色体转到甘蓝型油菜(AACC)的加拿大品种Andor上，得到单体添加系(AACC+IB)，用RAPD等手段标记了B组染色体，将10个引物的12个标记分别定位在6条B染色体上，促进了染色体遗传图谱的建立。申书兴等对同源四倍体大白菜游离小孢子培养，获得109个三体株系，克服大白菜二倍体与四倍体杂交不育，不能通过三倍体获得三体的困难，为大白菜三体系的创建提供了新的途径。

3．8 染色体加倍是物种演变的重要途径之一根据物种染色体的倍性变化来说明物种的进化。Harlan(1975)在研究植物多倍体起源的基础上，认为自然界多倍体形成的主要路线是有性多倍化。芸薹属Brassica物种间的关系可以说明杂交与染色体加倍及物种形成的密切关系，即经典的U三角关系。这6个物种为中国油菜(AA，n＝10)、黑芥(BB，n＝8)、甘蓝(CC，n＝9)、芥菜(AABB，n=18)、欧洲油菜(AACC，n＝19)、阿比西尼亚油菜(BBCC，n＝17)。Waters等(1996)发现这些异源多倍体种同时具有两个二倍体祖先的植物核rDNA重复序列，而且在欧洲油菜和阿比西尼亚油菜中，两个亲本rDNA序列的摩尔数相等，表明其中rDNA未发生同步进化。

4 需要解决的关键问题

4．1 克服蔬菜多倍体的低稔性刚诱导成功的四倍体其孕性是很低的，笔者在诱导西瓜同源四倍体过程中发现，由于植株受到秋水仙素的毒害，生长异常缓慢，雌花出现很少，自交坐果很困难，往往坐不住果。坐果后，种子很少，有时只有10粒左右或更少。随着种植世代的增加，其孕性慢慢恢复。但四倍体西瓜种子最多也只有100粒左右，仍是二倍体种子数的1／5-1／10，采用适当的育种方法如混合选种、品种间杂交等措施也可使孕性提高。很多试验证明采用增施磷、钾和镁、硼等微量元素促进同化物质的运转等栽培措施可以提高孕性。

4．2 通过大量的四倍体原始材料进行选择人工刚诱导成的多倍体只能代表未成熟的多倍体，其基因型是未经选择的而且是不平衡的，应该在大的多倍体群体上进行有效选择，才能获得理想的多倍体。不要刚诱导出的少数多倍体性状不好，就否定多倍体的优势。当然此项工作是很艰苦的。

4．3 确定合适的倍性为育种目标每一物种有它能忍受的最适宜的染色体数目，超过或低于这个适宜的数目，表现常常是不好的。有时是三倍体最合适，而不是四倍体或二倍体。

4．4 对不同倍性蔬菜，采取相应的栽培方式三倍体无籽西瓜的栽培，主要存在三低(采种量低、发芽率低、成苗率低)，但通过异地采种、破壳高温催芽、人工授粉等措施，使无籽西瓜容易栽培，并得以大面积推广。在美国，无籽西瓜的面积已经占西瓜总面积的30％左右，发展势头迅猛。

番茄脐腐病发生原因研究进展

一百多年前，已经有脐腐病是一种生理病害的报道(Selby,1896)，到了20世纪40年代，有人通过试验证明番茄脐腐病与钙素营养存在着一定的关系。目前普遍认为缺钙尤其是果实顶端缺钙是引起番茄脐腐病的主要原因。但是以此为理论依据还不足以解释番茄脐腐病发生的机理。尽管脐腐病的研究历史已过百年，但导致其发生的原因还没完全搞清楚。

1 发病症状

脐腐病发生时，首先在果实顶端出现一个或几个凹陷的斑点，渐渐变为暗绿色的斑块。从发病开始大约一周后，病斑扩展到最大面积，最后收缩或萎陷，在胎座的顶端形成一凹陷的革质状枯斑，病斑附近的果皮也从褐色逐渐变为黑褐色。脐腐病一旦发生，果实会提前成熟，并且比正常的果实小。脐腐病的初始发病期一般是在开花后的12-15天，这一时期果实体积增长相对较快，对钙的需求量相对较大，容易引起局部缺钙，导致脐腐病的发生。但是也有学者认为在果实发育的任何阶段都可发生。

2 缺钙与番茄脐腐病

之所以把缺钙作为导致番茄脐腐病发生的主要原因，是因为在番茄果实的顶端，Ca2+的含量最低，并且通常情况下发病果实中Ca2+的含量比正常的果实低。在Ca2+含量非常低的土壤中种植番茄，脐腐病的发生率较高，并时常伴随着其他症状，如叶片失绿，根和茎的伸长受阻，根尖、茎尖坏死等，因此在果实膨大期，喷施钙肥，尤其是在缺钙的条件下，可以降低脐腐病的发生率。起初把脐腐病的症状表现归因于细胞壁失去了弹性，后来发现在细胞萎陷之前，由脐腐病引起的症状已表现出来。众所周知，钙对维持膜的完整性和选择透性是必需的，有人认为，脐腐病发生时，由于缺钙而导致膜的完整性受到破坏，增加了通过细胞膜离子的种类和数量，结果导致膨压丧失，细胞液进入细胞间隙，使发病早期出现了水渍状病斑。但是有些学者发现发生脐腐病的果实与正常的果实相比，钙的含量没有大的差别。Franco(1999)发现即使果实顶端Ca2+浓度很高，也有脐腐病发生相当严重的现象。如果植株生长缓慢，即使在缺钙的条件下，脐腐病也不会发生。

3 环境的影响

3．1 生长抑制因子

盐胁迫、水分胁迫和铵毒害都可以诱导脐腐病的发生。自从Robbins(1937)报道增加盐的浓度会阻碍植株的生长、果实的发育，提高脐腐病的发生率以来，许多学者对高盐诱导脐腐病的发生做了大量的试验，取得了与Robbins相吻合的结果。但是也有人得出与此相矛盾的结果，对栽培在棉渣上的番茄增施NaCl，既没有提高脐腐病发生率，也没有降低果实中Ca2+的含量。所以，关于盐与脐腐病之间的关系还有待进一步证实。关于水分胁迫与脐腐病的关系，也有众多的学者进行了研究。Selby(1896)首先提出脐腐病的发生与土壤干旱有关。有的学者认为脐腐病的发生不能完全归因于水分胁迫，而是水分胁迫加重了脐腐病的发生。Obreza等发现当水分胁迫增加时，脐腐病发生率只是偶尔有增加的现象。据Adams等(1993) 报道，土壤含水量过高可以提高脐腐病的发生率。 Robbins(1937)、Gerard(1968)等发现不仅植物吸收水分受阻加重了脐腐病的发生，而且过高的蒸腾速率也可以提高发病的机率。在高温等逆境条件下，铵态氮肥阻碍了植株的生长，果实的发育，并且提高了乙烯的放出量，引起叶子的偏上生长。因此施用铵态氮肥或增加肥料中NH4+／N03-的比例都可以提高脐腐病的发生率，加重病情。沙培番茄在坐果期施用铵态氮肥，一周内就会诱导脐腐病的发生。以上这些因素通过间接地阻碍Ca2+向果实的供给导致局部缺钙而引起脐腐病的发生，其发生机理主要有三个方面：①阻碍根部对Ca2+的吸收；②使Ca2+在植株中的运输受阻；③叶片与果实对Ca2+的竞争效应。

3．2 生长促进因子

一些促进植物生长的因子也能诱导脐腐病的发生。在有效氮浓度较高的情况下，植株生长较快，而脐腐病发生的机率也相应的提高，尤其是在第一穗花开放之前，植株生长过快更容易诱发脐腐病。在果实膨大期，如果增加光照时间，提高温度，或者提高温度与增加光照相结合，这些生长促进因子都可以提高脐腐病的发病率。由此看来，在番茄花期喷施一些生长抑制剂可以降低脐腐病发生的可能性，如施用GA合成抑制剂或堆肥来降低氮的吸收等。有些学者认为，生长旺盛的植株脐腐病的发生率较高是由于细胞膜的生物合成需要较多的Ca2+，尤其在果实膨大期，细胞分裂和生长迅速，供应的Ca2+不能满足果实发育的需要。但是这不能解释为什么在很多情况下生长迅速和易发病的品种却不发病。

3．3 各因子间的相互作用

从上面的内容可以看出，脐腐病发生并不能只归因于某单一因子。对于Ca2+与番茄脐腐病之间有着密切的关系，很少有人怀疑。但是很多学者认为其他因子也起着非常重要的作用。水分胁迫与较高的蒸腾速率，水分胁迫与较高的温度，高温与高浓度的NH4+，盐胁迫与高温等各因子之间的相互作用增加了番茄脐腐病发生率，加重了发病果实的症状。生长抑制因子和生长促进因子相互结合也可能导致番茄发生脐腐病。Adams等(1993)指出，脐腐病发生的原因通常是光照、温度和影响Ca2+吸收的环境胁迫共同作用的结果。而温度(大气温度和土壤温度)可能是诱发脐腐病的主要环境因子。在高温、营养过剩、盐胁迫的条件下，脐腐病发生的可能性大大提高。不同因子作用的先后顺序对植株的生长发育有着非常重要的影响。开始灌溉条件较好的植株移到干燥的环境中，或者遮荫条件下生长旺盛、果实正常的植株移到没有遮荫的温室中，脐腐病的发病率会大大提高，同样的植株，如果光照的时间较短，移到光照较强和温度较高的环境中，就比那些经过较长时间光照处理的植株较易发生脐腐病。

4 小结

番茄脐腐病发生的原因是多方面的，很难说每次发病是由哪种具体的因子引起。大部分的报道都是从环境因子与Ca2+相互作用探究其发生的原因。Pill(1978)提出番茄脐腐病是一个数量性状的现象，是多因子相互作用的结果。无论是对番茄还是对其他作物，快速生长的器官内Ca2+浓度的降低和K+／Ca2+比例的升高都是反映生长速率的重要生理指标，且生长速率与GAs的生理活性密切相关。喷施外源GAs可以提高番茄脐腐病的发病率。因为GAs能够阻碍Ca2+吸收和运输。喷施GA生物合成抑制剂可以提高植株内Ca2+的浓度。Ca2+能够保护膜的完整性，降低渗透性，阻止胁迫因素引起的离子渗漏，GAs与Ca2+有着相反的作用，它可以破坏膜的完整性，增加膜的透性。因此对脐腐病敏感的品种不仅会由于Ca2+浓度太低而发病，而且GA的水平也有着非常重要的影响。当在番茄幼果中发现较高浓度的有生理活性的GA、较低的Ca2+浓度时，脐腐病发生的可能性就比较大。但是，植株生长旺盛，Ca2+浓度较低并不一定预示着脐腐病发生的机率就高。因为细胞膨压的丧失和溶质的渗漏，可能只在由于各种胁迫因素如高盐、土壤水分缺乏、铵中毒而引起的膜完整性受到破坏时发生。当然，这些胁迫因素只有超过一定的限度才会诱导发病，而轻度胁迫还可增加植株对逆境的忍耐能力，降低脐腐病发生的机率。因为在轻度的逆境下，可以诱导ABA的合成，ABA可以降低GA的活性，提高植株对Ca2+的吸收能力。综上所述，Ca2+在发生番茄脐腐病原因中所担当的角色应该重新定位。尽管缺钙与脐腐病的发生有着密切的关系，但是不能再把它看成是第一位的或独立的因素，番茄脐腐病发生的主要原因可能不只是因为果实中Ca2+浓度过低。因此，控制番茄发生脐腐病的措施不应该只集中在提高果实内Ca2+的水平上，而应该综合各个方面的因素，使植株保持适宜的生长速度，避免生长环境的急剧变化，减少几种环境胁迫同时发生的可能性，从而达到预防脐腐病发生的目的。

甘蓝型油菜裂果抗性研究进展

油菜是世界温带农业区最重要的油料作物，但收获前和收获时的裂果现象容易给生产造成严重损失。由裂果造成的损失一般可占籽粒总产量的8%-12%，如收获延迟，产量损失可能增加到20%以上。据估计，每平方米土表累计约有10 000粒种子落下，其中有不少种子在土壤中遇到缺氧等逆境胁迫而诱导产生二次休眠，如在欧洲等油菜一年一熟制地区土壤中可存活多年，最长可达10年，并逐渐产生大量油菜自生苗，影响下茬作物的生育并导致生物混杂，进而降低品质。通过提前收割或喷施干燥剂可提高成熟一致性，但未成熟种子中的叶绿素对油分有影响。增强油菜品种的抗落粒性可提高籽粒成熟一致性，从而降低生产成本，提高种子收获效率和菜籽油的品质。因此，研究油菜裂果抗性具有十分重要的意义。在芸薹属的芥菜型油莱、埃塞俄比亚芥、黑芥中已发现裂果抗性变异，某些材料表现抗性较好，而现有甘蓝型油菜品种，裂果抗性变异很小，很难进一步发掘甘蓝型油菜品种的裂果抗性材料。Morgan等通过甘蓝与白菜型油菜的种间杂交，获得一批遗传变异很大的人工甘蓝型油菜合成种，包括部分抗角果开裂特性的品系。有关研究表明，培育具良好农艺性状的抗裂果油菜品种，首先取决于植株株型特征研究，包括整个植株和花序的形态特征、单个角果的形态特征以及各性状之间的相关性等。但到目前为止，将抗裂果性状导入甘蓝型油菜还存在许多困难。

1 角果形态构造及开裂过程油菜果实是圆筒型的长角果，由2片线状果瓣组成，两果瓣间有假隔膜相联。果瓣两侧有包含离区的连接处，由一层简单的薄壁组织细胞组成，离区位于果瓣边缘和包含有通向果柄的主要维管束的中央假隔膜之间。离区细胞在角果衰老时发生分离，角果完全成熟时即彻底分离，随后果瓣裂开。随着果瓣脱水，位于包含维管组织的木质果瓣与隔膜结合处的分裂区细胞发生分离，促使角果开裂。伴随着多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturo-nase，PG)胶质减少，分裂区细胞沿果瓣中线分离，接着分离区细胞壁破裂。分裂区细胞分离发生在开花7周后，即水分完全丧失之前。角果开裂所需的力来自于角果与其它角果、花序接触或收获机械的作用，使果瓣与隔膜的跨分裂区的连接微管断裂，最终使角果开裂。

2 裂果抗性评价人工合成的不同基因型甘蓝型油菜的裂果抗性存在差异。Morgan等对人工合成的不同甘蓝型油菜品系的株高、茎粗、15cm花序上的角果数与结角密度、分枝数、果瓣厚度、角宽、种子重、角果着生角度、喙长、角长、每角粒数、花序宽、裂果抗性田间评分、20s挤压完整角果数、角果开裂需力等多个性状及相互关系进行了研究。结果表明，正反交材料之间裂果抗性表现相似，具明显抗性差别的材料来源于人工合成甘蓝型油菜品系DK1和DK3[DK1由人工合成甘蓝型油菜(B.rapa chinensis X B.oleraceaalboglabra)与甘蓝型油菜(N-0109)杂交而成；DK3是DKl的反交材料]与来源于Westarl0的品系DK4和DK5[DK4是由双单倍体春甘蓝型油菜(Westarl0)与甘蓝型油菜(N-0109)杂交而成；DK5为DK4的反交材料]及其它栽培种之间。与DKl和DK3相比，DK4和DK5表现为植株较矮，自然宽度较小，株型松散。DKl和DK3的裂果抗性田间评价平均值比DK4和DK5及其它栽培种的田间评价平均值高，且品系内株行之间裂果抗性田间评价值变异幅度较大。从统计上分析各测定性状间的关系表明，角果开裂需力、随机挤压检测与裂果田间评价之间呈极显著正相关，而角果开裂需力与喙长、角长和每角粒数等呈负相关。角果皮厚度与随机挤压20s后的完整角果数、角宽和角果着生角度呈显著正相关，与角果开裂需力、裂果抗性田间评价、15cm花序角果数呈正相关，与喙长呈负相关。根据各显著相关性状间的决定系数，将测定的性状分成3个基因组：形态性状、花序性状和角果脱落评价性状。各组性状均相互独立，因此在育种中可独立选择或淘汰。随机挤压20s后的完整角果数与植株高度具有相关性；喙长与角果开裂需力相关，但相关性较低(r=-0.610)，变异系数仅37%。因此，在育种实践中，喙长只能作为甘蓝型油菜裂果抗性选择的参考指标之一。从扫描电镜下观察到，裂果抗性不同的人工合成甘蓝型油菜品系间，角果维管组织的范围、位置和数量有相当大的差异。裂果抗性强的人工合成甘蓝型油菜品系，果瓣分裂区的维管束体积较大，与花柄相连的维管束沿分裂区的内壁有较多的维管组织。不同品系的角果分裂区细胞分离程度也有很大差异，裂果抗性弱的品系，其细胞分裂区表面粗糙；相反，裂果抗性强的品系，由于分离区的细胞沿单室分离，分裂区表面光滑。电镜观察的解剖学差异表明，不同品系控制抗裂果的物理及生化机制存在差异。裂果需能较多的晶系，其分裂区的维管束数较多，分裂区内细胞的细胞壁解离减少，这些差异造成了角果开裂所需的力不同，因此产生了裂果的抗性。 Josefsson认为裂果抗性提高与果瓣连接处木质化的增加有关。诱导突变体解剖分析表明，随着连接果瓣和中隔膜的木质化细胞桥的形成，分离区的细胞加厚，通过果柄维管束连接果瓣的初微管痕(prominent vascular traces)接近于分离区内侧边缘。很显然，这些结构的改变与抗裂果性的提高有关。

3 提高裂果抗性的机理

3.1 调节激素和酶的活性增加角果开裂所需的力，阻止或减慢离区细胞壁的分离，有助于提高裂果抗性。Child研究表明，IAA可减少离区对乙烯的敏感度；当IAA含量下降时，离区细胞对乙烯易起反应，因此，IAA与乙烯的相互作用有可能决定细胞壁是否开始分离。用功能类似于IAA的人工合成生长素2-甲基-4-氯苯乙酸(2-methy-4-chlorophenoxyacetic acid，4-CPA)处理抽菜植株，其离区细胞分裂延迟，完熟角果开裂需更多的力。当IAA含量较低时，角果果瓣内产生的少量乙烯足以激发离区细胞的分裂。乙烯含量的短暂呼吸峰发生在开花5周后(植株衰老之前)，并且乙烯大多转移到种子中。对成熟角果生化分析表明，纤维素酶活性与离区细胞分离有关，随着角果组织中乙烯呼吸峰的降低，纤维素酶活性提高。多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase，PG)的1个同功酶(PG35-8)的活性与离区细胞中间片层的破裂有关。因此，通过遗传操纵以产生抗裂果性状的植株，有2个途径可以利用，一是保持分离区细胞中IAA的活性，二是抑制离区细胞的细胞壁分解酶的活性。

3.2 辐射诱导产生突变 Kadkol等人发现，甘蓝型油菜栽培种的角果开裂所需力一般为0.05-0.21mJ，如油菜品种JetNeuf角果开裂需力在此范围之内。然而，JetNeuf经辐射诱变后，突变体角果开裂所需力为亲本的4倍，表明辐射诱导突变可使甘蓝型油菜的抗裂果性显著提高。尽管辐射诱导突变可提供大量裂果抗性资源，但由于其可育性很低，不能与其它栽培种进行杂交以分离抗性株系，因此尚不能直接应用于育种。

4 展望抗裂果性强的植株一般表现株型高大、茎秆粗壮、角短、角皮厚、喙短等特性，而这些特征与所需的优良农艺性状尚有较大差距。把抗裂果性状导入油菜栽培品种，目前尚存在一定难度：甘蓝型油菜品种的裂果抗性变异小；客观评价裂果程度方法尚不完善；角果、花序和株型构造等都可影响角果开裂，增加了研究的复杂性；由于芸薹属各个种之间有关性状的转基因技术、特别是标记辅助技术目前尚不完备，因此分离和转育抗性基因还存在困难。目前，Morsan等进一步对上述人工合成的不同甘蓝型油莱晶系的籽粒品质性状与化学组成、DNA分子差异与多态性以及其他遗传特性与育种应用潜力等开展了深入研究。随着胚挽救、转基因技术及分子标记辅助育种等新技术的不断发展和应用，并结合常规选择育种方法，将裂果抗性与适当的遗传背景相结合应用于育种及生产实际，是大有可为的。

茄子体细胞融合与遗传转化研究进展

茄子是一种重要的作物，在蔬菜中排名第四。为害茄子的两大病害是黄萎病与青枯病，黄萎病20世纪50年代初仅在东北局部地区发生，随着茄果类蔬菜面积扩大而迅速蔓延；80年代中期以来，北方部分地区发病田块达40％-100％，发病范围日益南扩。青枯病主要发生在长江流域，一般可致减产20％-30％，严重时可损失50％-60％。由于这些病害的影响，使得茄子产量和品质降低，而且，至目前为止，还没有发现有效的杀菌剂。尽管轮作可起到一定的防治作用，但实施比较困难，所以经济、有效的对策是选育抗病品种。但抗病育种也存在两个问题：一是栽培品种中没有抗源基因，野生种虽有抗性基因，但与栽培品种有性杂交较难，即使能有性杂交，也会引起杂种不育、不稔等问题；二是用常规育种的方法转育抗病基因，转育时间较长。通过生物工程技术的手段，如体细胞融合能越过有性杂交的障碍，将目的基因直接或间接转入茄子的基因组内等，为解决这些问题提供了新的途径。本文就茄子在体细胞融合和遗传转化等方面的研究进展作一个综述。

1 体细胞融合在茄子的野生种及近缘种中，有许多具抗病、抗虫、抗逆等优良性状的材料，利用潜力大，但它们与茄子的栽培品种杂交时，存在许多问题，如有性杂交困难，或虽能进行有性杂交，但杂种不育或不稔。离体胚培养对克服合子胚形成后的胚胎发育障碍发挥了积极作用，但对合子胚形成前的受精障碍等则无法解决。此外，有性杂交很难形成细胞质杂种以实现胞质基因控制的有益性状，如雄性不育、除草剂抗性的转移。因此，体细胞融合技术为解决茄子生产上的上述问题带来了希望，开辟了新途径。最早进行茄子体细胞融合试验的是S．Cleddie (1986)，他获得了26个非整倍体杂种再生株，经检测，杂种株对根结线虫具高度的抗性，也具有抗螨的潜能。但由于杂种的高度不育性，其在育种实践上无应用价值。之后又获得了抗根结线虫和螨、抗细菌及真菌性枯萎病、有除草剂抗性的体细胞杂种。而且有的杂种株有非常高的果实产量，达到9 kg／株，是其亲本的3-4倍。近来，属间体细胞杂交获得了成功。Toki(1990)用带有三个突变的烟草与茄子作了尝试，之后，Guri(1991)在番茄与茄子之间进行体细胞杂交，只在愈伤组织上获得了叶原基，后来，其中一个亲本的原生质体在融合前经-射线处理后，再进行融合，获得了正常的再生植株。

1．1 体细胞融合的技术 PEG法是应用最多的一种化学诱导方法，茄子的原生质体融合多采用此方法，近年来此方法经过改进，发现在PEG诱导液中加入二甲基亚砜(DMSO)可提高诱导频率。电场融合是目前最流行的物理诱导方法，此法在茄子中的应用也较多。此法的优点在于避免了化学药剂的毒害，且大大提高了融合频率。近年来发湖南农业大学园艺园林学院展的物理诱导法，如聚集的微束激光技术，需要特殊设备，因而在茄子的体细胞融合中应用较少。

1．2 杂种细胞的筛选目前在茄子体细胞融合的杂种细胞的筛选上，一般采用以物理或化学特性的差异来辨别和筛选的方法。Gleddie等(1986)根据两融合亲本的物理化学特性的差异，即一个亲本具氮尿嘧啶(AU)的抗性，另一亲本在含ZT的再生培养基上分化的芽能产生花青素，而选出既具氮尿嘧啶抗性又能在芽分化时产生花青素的组织，即体细胞杂种。Guri等(1988)也是根据两亲本的差异，即一亲本在KM诱导培养基上不能分裂，而另一亲本在芽分化时能产生独特的淡绿色的物质来筛选杂种细胞。

1．3 体细胞杂种的鉴定目前茄子体细胞的鉴定大多采用生化和分子生物学的方法，最常用的生化方法是同工酶分析，杂种的同工酶谱往往同时表现两亲本的特征酶谱，或出现两亲本所没有的新谱带。Guri等(1988)通过PGI和GOT的同工酶分析进行杂种鉴定。Gleddie等也成功地分析了杂种的AAP、6-DPGH和LAP同工酶。常用的分子生物学方法有Southern印迹杂交、RFLP和RAPD等几种方法，Cecile Collonnier(2001)还采用过叶绿体微卫星分析的方法。用得最多的是Southern印迹杂交，用于杂交的DNA包括核DNA、叶绿体DNA(cpDNA)及线粒体DNA(mtDNA)。一般来说，在进行杂种鉴定时，为获得确切证据，往往需在生化分析(主要是同工酶分析)的基础上，同时进行分子生物学的分析。在茄子的体细胞融合中，通常出现的问题是：体细胞杂种不育或育性较低，这限制了其在育种实践中的应用。在融合亲本的亲缘关系较远时，往往引起不对称的融合，但不对称融合有可能产生可育的体细胞杂种，这一点值得考虑。C.J. Jarl的结果证实了这一观点。

2 遗传转化基因工程为茄子育种提供了一个新的工具，通过插入编码人们所期望性状的基因，使现存的品种得到改良或创造新的种质。由于茄子离体再生系统比较完善，对植株再生途径(即经过体胚还是经过愈伤组织器官化成苗)比较容易控制，而且转基因植株的再生效率能通过TDZ(0．1 m)、抗生素(如augmentin300g／ml、kanamycin 50 g／ml)提高，再者，茄子对以农杆菌为介导的共和载体(cointegrate vector)和双价载体(binary vector)的反应都很好，所以，茄子非常适合于这种技术的应用。自Guri(1988)成功地将NptⅡ基因转入茄子的基因组，获得转基因植株以来，茄子的转基因工程发展较快。茄子在基因工程上所取得的成就主要体现在两个方面：一是抗CPB(Colorado Potato Beetle)。CPB是欧洲和北美的一个主要害虫，为得到CPB的抗性，将编码鞘翅目昆虫特定毒蛋白的基因导入茄子体内，但其表达量相当低，不能有效控制CPB。后来，Arpaia(1997)将经诱变得到的基因CryⅢB成功导入，表达量较高，经DAS-ELISA分析，93株中的57株叶片中有Cry Ⅲ B毒素，在测试的44株中有23株对CPB的幼虫有抗性，而且其自花授粉后代也显示了同样的抗性。转入工合成的基因CryIAb及CryⅢA也获得了相似的结果。另一个方面就是得到了转基因的单性结实品系。Rotino等(1997)将单性结实基因iaaM置于特定于子房表达的启动子Def H9的控制下，导入茄子基因组内，结果表明，在未授粉、无外源激素、甚至在低温下，这种转基因茄子都能长出单性结实的无籽茄子，且其大小、重量与对照无差别。当授粉时，能结正常有籽的茄子。Donzella(2000)在未加温温室进行了试验，认为带单性结实基因的杂种茄子比未转基因的对照明显高产，在商业上有应用价值。近来，Frijters等(2000)通过插入来自番茄的Mi-1基因，获得了对根结线虫具稳定抗性的转基因植株，另外，A．Szasz(1998)等成功地将黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因导入茄子基因组内。

2．1 转化的受体类型在茄子的基因工程中，大多使用无菌苗的嫩叶片作受体，其次就是胚轴、子叶，也有用茎作受体的。

2．2 转基因植株的检测常用的检测方法主要有三种：一是对基因的表达产物的分析，如酶活性的分析、Western blot、DAS-ELISA，或是对基因表达产物毒蛋白进行毒性分析，或是对GUS等基因的表达产物所产生的颜色进行分析；二是应用分子生物学的方法对基因的转录产物的分析，如Northern blot；三是用分子生物学方法对基因本身的序列进行分析，常用的方法有PCR、Southern blot，也有用DNA slot blot、DNA dot blot。对转基因植株的检测一般是上述几种方法的结合，有时还需进行田间试验，或者对转基因植株后代进行分析。

3 主要问题及展望

①茄子种间、属间的体细胞融合都获得了成功，得到了具野生种优良抗性的体细胞杂种。但存在的一个主要问题是：体细胞杂种的育性较低。虽然在这方面进行过一些尝试，如融合前的原生质体用射线、x射线照射，及通过不对称融合曾经获得了可育的体细胞杂种。今后宜探索新的物理化学方法或生物技术手段，以提高体细胞杂种的育性。另外，融合亲本也从种间扩展到属间，用具优良抗性的属间甚至是科间作为融合亲本，扩大应用的亲本范围，这一点值得考虑。

②茄子基因工程在其遗传育种、品质改良上的应用前景十分乐观，且已经取得了较大的进展，转基因茄子已经在生产上得到应用，但依然有许多不容忽视的问题存在。

a．目前已从茄子的幼苗外植体、原生质体和花粉(花药和小孢子)培养建立了再生体系，但用于遗传转化的只有幼苗外植体再生体系。从原生质体和花药和小孢子培养两条途径需进一步探索，特别是单倍性的小孢子或单倍性的愈伤组织和胚作为受体值得考虑。

b．采用的转化方法单一。基因转移的方法很多，如PEG法、载体法、电激法及基因枪法、浸种法和直接导入法。目前，在茄子中仅用载体法及直接导入法进行基因转移，为提高转化效率，今后可尝试其他的基因转移方法。

c．目前在茄子遗传转化方面取得较大成功的主要是抗虫及单性结实，但困扰茄子生产的还有真菌、细菌及线虫等病害，特别是茄子的青枯病及黄萎病两大病害，每年给茄子生产造成巨大损失。今后需扩大目的基因谱，使茄子遗传转化多方向展开，提高实际应用水平。

油菜籽(饼)中硫代葡萄糖甙测定方法研究进展

油菜籽及其制品中存在硫代葡萄糖甙(简称硫甙)，从营养角度来看，其本身无毒，但被动物摄人后，经芥子酶(即硫甙的水解酶)水解生成有毒的异硫氰酸酯(ITC)和恶唑烷硫酮(OZT)，直接影响菜籽饼的综合利用。但某些硫甙及其降解产物对油菜抵抗某些病虫害发挥着重要作用，如丙烯基硫甙是一种很强的抗真菌物质，表明硫甙具有有益的作用。因此，硫甙的测定技术对于品质育种、抗性育种以及栽培和种子收购、籽饼加工等都十分重要。硫甙在不同条件下均能解离生成定量的葡萄糖、硫酸根或ITC及其衍生物、脱硫硫甙等(化学反应式略)。通过测定硫甙的解离产物，就可以转化得到硫甙的含量。据此，硫甙测定方法可分类为：硫甙直接测定法；测定解离产物葡萄糖；测定解离产物硫酸根；测定解离产物ITC或其衍生物、脱硫硫甙等。我国硫甙测定技术始于20世纪80年代，本文主要阐述我国硫甙测定技术研究所取得的进展。

1 直接测定硫甙直接测定硫甙的方法有氯化钯法、麝香草酚分光光度法等。氯化钯法由西德哥廷根大学Thies W提出，早期的方法简单、快速，但由于硫甙钯沉淀影响了比色和观察，色阶不明显，定量困难。1983年吴谋成等在试验中加入分散剂羧甲基纤维素钠，使比色液成为溶胶清液，清除了硫甙钯沉淀对比色的影响。进一步改进硫甙钯的显色反应条件，使氯化钯法从定性、半定量法变成为快速、简单的定量分析方法。因没有考虑各硫甙分量之间的摩尔吸光系数的差异，测试结果的可靠性较低，但由于快速简便，氯化钯法常用于速测初级育种材料。麝香草酚法由波兰学者Brzeninski和Men-delewsi于1984年建立，利用DEAE葡聚糖A25层析微柱提纯硫甙。经提纯的硫甙在硫酸溶液中脱水生成硫葡萄糖，与葡萄糖的反应一样，生成有色物质，由于二者的最大吸收波长与摩尔吸光系数一致，因此可以用葡萄糖代替标准硫甙制作仪器的工作曲线。当测出未知样品生成的颜色在最大吸收波长下的吸光度，就可以由葡萄糖标准曲线求得硫甙的含量。此方法简单、快速、灵敏。1987年戈兰英引进并进一步完善，提出采用丙烯基硫甙或已知硫甙含量的饼粕在与样品处理相同的操作条件下制作标准曲线，避免了用葡萄糖作标准曲线时，不经吸附和洗脱带来的误差。但此法测定结果的重现性差，原因是干扰因素很多。碳水化合物如纤维素、淀粉和多糖等均能在浓硫酸溶液中与麝香草酚起显色反应，因此所用的测定器皿和周围空气要洁净；分析用的离子交换树脂为DEAE葡聚糖，本身就能和麝香草酚起显色反应。经过改进的麝香草酚法是测定硫甙较理想的方法，McGregor用此法来计算液相色谱法中各硫甙分量的相对校正因子。

2 测定解离产物葡萄糖测定硫甙的解离产物葡萄糖，通常采用酶解方式将硫甙中的葡萄糖解离，酶解能够使反应具有专一性，保证测得的葡萄糖不含非硫甙葡萄糖。由于一分子硫甙解离得到一分子葡萄糖，只要准确测定葡萄糖含量，即可获得硫甙总量。葡萄糖氧化-过氧化物法3，5-二硝基水杨酸分光光度法、蒽酮比色法等都是目前测定葡萄糖的常用方法。将样品置于密闭容器中，在干燥箱(105℃)烘20min，芥子酶就会完全失活，或者以40%酸化甲醇完全抑制内源硫甙酶活性，然后分别测出芥子酶充分水解硫甙后样品的总葡萄糖量和芥子酶完全灭活后样品的非硫甙葡萄糖量，二者的差值即为硫甙葡萄糖含量；或者利用微量的DEAE葡聚糖A25层析柱，将流经样液中的硫甙吸附，游离葡萄糖就会流出去，然后用酶制剂将硫甙水解，再洗脱酶解产生的葡萄糖，通过测定洗脱液中的葡萄糖，即可得出样品的硫甙含量。若采用内源芥子酶酶解，不同硫甙含量的材料所需的酶解时间不同，低硫材料需酶解2min，高硫材料需10min；不同油菜类型的油菜籽也不同，但一般以20min为宜。如采用芥子酶制剂，完全酶解所需的时间应根据添加的酶量和反应的条件而定。另一方面，需要避免或减少酶解体系对于后续葡萄糖测定的影响，如用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶测定葡萄糖时就要注意到酚类物质的严重干扰会使结果偏低，McGregor采用活性炭滤纸过滤，效果很好。

3 测定解离产物硫酸根用盐酸处理硫甙，或用强氧化剂氧化硫甙或样品中总硫等，将硫转化为硫酸根，测出硫酸根含量，继而转化为硫甙含量，如酸解法、EDTA容量法、电位滴定法等。这类方法中最突出的问题就是非硫甙硫酸根影响分析结果。对于酸解法，目前消除非硫甙硫酸根的方法是在加热前后分别测出样品的硫酸根含量，根据两者差值计算出硫甙含量，但无法知道是否有其它物质在同样加热条件下解离出硫酸根，从而使结果有可能偏高。对于非硫甙硫酸根的研究表明，刚收获的油菜籽和放置2年以上的油菜籽中的游离硫酸根是很少的，菜籽中非硫甙硫酸根占总硫酸根的比例为0-26%，但在饼粕中其比例可占90％，说明非硫甙硫酸根的影响不容忽视。 EDTA容量法采用70%甲醇水溶液提取油菜籽，其提取液中含硫成分大部分是硫甙，将提取液蒸干、消化后转化成硫酸根，用EDTA滴定法测定出硫酸根，计算菜籽的硫甙含量。该法操作繁琐费时，而且用70%甲醇水溶液能否完全提取出油菜籽(饼)中的硫甙，以及提取液中含有的少量含硫蛋白，都会使得测定结果可靠性降低。电位滴定法是我国20世纪80年代初期的主要研究方法，利用高酸和高氯锰酸钾分解氧化或直接燃烧油菜籽(饼)，把样品中有机硫变成硫的氧化物，继而转化成硫酸根，用电位滴定法测定出硫酸根的总量(或硫的总量)，扣除蛋白质含硫量(约0.16%)后，转化成硫甙含量。这种以总硫为基础计算出的硫甙含量可靠性较差。

4 测定解离产物异硫氰酸酯或其衍生物、脱硫硫甙测定硫甙解离产物主要应用硫脲紫外光谱法、TMS气相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)等。硫脲紫外光谱法由加拿大Wetter和Youngs提出，1983年成为硫甙测定的国际标准方法，主要测定OZT以及ITC与氨作用生成的硫脲在紫外区的吸收，根据经验公式计算出硫甙的含量，以菜籽饼的ITC和OZT的含量表示。20世纪80年代初欧共体对于低硫标准规定在0.3%以下，就是指这两种物质的含量应少于0.3%。中国农科院油料所品质育种组对硫脲紫外光谱法进行改进，用气相色谱法直接测定具挥发性的ITC，而OZT依然用紫外色谱法，这就是UV-GC法。但此方法只对硫甙降解产物3-丁烯基异硫氰酸酯、4-戊烯基异硫氰酸酯以及2-羟基-3-丁烯基异硫氰酸酯转化的OZT进行定量分析，以这3种化合物的含量来表示结果，某些硫甙成分如酚基硫甙、吲哚类硫甙、苄基硫甙等，由于不产生ITC和OZT而未能被包括进去，使结果偏低。 TMS气相色谱法采用三甲基硅烷化试剂(TMS)与脱硫硫甙作用，生成具有挥发性的三甲基甲硅烷脱硫衍生物，利用气相色谱法测定，采用内标法就可以测出各硫甙分量，它们之和为硫甙总量。但该法对吲哚类硫甙尚不能正确定量，原因是其分解的规律性难以掌握，因此求出的各硫甙分量之和并不能代表油菜籽中的硫甙总和。有关研究表明，在高硫和低硫品种中，吲哚类硫甙含量比较稳定，但在低硫品种中吲哚类硫甙占硫甙总量的1/3-1/2，因此低硫品种的此类硫甙是不容忽视的。 HPLC测定硫甙包括有两项技术，一是离子对技术，可直接测定整个硫甙分子，速度快，简便，但其使用的缓冲液和平衡液对HPLC仪器非常不利，对分辨某些主要硫甙还存在一些问题，因此普遍采用第二项技术，即反相HPLC技术，通过测定脱硫硫甙而测出硫甙的含量。该方法能测定包括主要硫甙在内的10多种硫甙成分，采用内标法，对各硫甙分量的相对校正因子在各实验室进行固定，最大限度地减少实验误差，是目前最为精确的分析方法，被ISO采纳为国际标准方法，我国现正在以此项技术来制定我国的国家标准。

5 展望随着科技进步，更高的准确度、更快的速度和无损伤化测定是当前硫甙分析技术的发展方向。一方面对传统测定方法进行改进，提高准确度和速度，如用酶解提纯的硫甙对释放出来的硫酸根进行测定，可消除非硫甙硫酸根影响，提高硫甙测定的准确性；用反相离子对色谱法，无需脱硫即可直接测定硫甙，提高测定速度。中国农科院油料作物研究所最新研制开发的双低油菜速测技术和NYDL-2000优质油菜速测仪，分析结果准确，速度大大提高，适应大量育种材料的分析。另一方面，开展新的测定方法的研究与开发，我国现正在积极摸索利用近红外分析仪在一定准确度允许条件下进行快速无损伤测定(该技术在国外广泛使用)。国际上开始采用胶囊毛细管电泳色谱技术测定硫甙，此法不需费时的脱硫程序，可直接分离硫甙，提高测定速度，但目前的硫甙分离条件只能分离某些硫甙，对所有硫甙进行分离还需进一步优化分离条件。

杏鲍菇培养料配方及配制

杏鲍菇属中温偏低的菇类，一年可生产两季，在春季、秋季出菇，即1月－2月或8月－9月生产菌袋，2月－4月或9月－12月出菇。那么，杏鲍菇菌袋怎么制作呢？

培养料配方及配制。配方一：杂木屑73%，麸皮25%，石灰1%，石膏1%，含水量60%－65。配方二：棉籽壳88%，麸皮10%，石灰1%，石膏1%，含水量60%－65%。将配料混合拌匀制成培养料。

装袋、灭菌、接种和培养。将培养料按要求装入菌袋，封口后放入灭菌锅内灭菌。先用猛火使锅内温度升至100摄氏度开始计时，8小时－12小时后闷4小时－5小时，然后将料袋取出。料袋冷却到常温时放入已消毒的接种箱内接种，接种量为5%―10%。将接种后的菌袋送往已消毒的培养室培养，室温应控制在20摄氏度―25摄氏度之间。30天左右，菌丝可长满袋，然后移至出菇房出菇。培养室要求黑暗、通气、不潮湿。

韭菜

基本信息

中文学名：韭菜，拼音：jiǔcài

拉丁学名：

别称：山韭、扁菜、起阳草

门：被子植物门，纲：单子叶植物纲

目：，亚目：

科：百合科，亚科：

族：，属：

形态特征

韭菜是多年生常绿草本植物，具宿根性，耐寒且喜欢在阴湿肥沃的环境生长，在日照充足和干燥环境中会使叶尖呈现焦黄色。与大多数的葱属本物一样，韭菜生有鳞茎，长有须根和细长的地下走茎。深绿色的叶子细长扁平，带状，闭合状的叶鞘形成假茎；长约10～30厘米，宽约1.5～1.8厘米，单叶丛生，由假茎(韭白)中长出。花果期为7～10月，花茎自叶束中长出，总花苞呈三棱形，为顶生伞房花序。总苞片为白色膜质，内有20～30朵小花，花为白色，雄蕊6枚，雌蕊1枚，中间有一子房。花朵由外向内依次开放。果实为蒴果，绿色三棱形；黑色半球形的种子，扁平，边缘具棱。

韭菜疫病

病害中文名：韭菜疫病
病害英文名： Chinese chives Phytophthora blight
病原信息：病原中文名：辣椒疫霉
病原学名： Phytophthora capsici Leonian
分类地位：真菌界卵菌门卵菌纲霜霉目，疫霉属，辣椒疫霉
病原介绍：菌丝丝状 , 无隔膜 , 宽 3.75～6.25 m , 蔓延于寄主细胞内外 ; 孢囊梗无色、丝状 ; 孢子囊顶生 , 单胞 , 卵圆至椭圆形 , 大小 28.01～59 24.8～43.5m；厚垣孢子黄色、单胞、球形 , 壁厚、平滑 ; 卵孢子球形 , 直径 30m , 雄器 17 15m , 一般不易见到。
病原中文名：烟草疫霉
病原学名： Phytophthora nicotianae van Breda de Haan、P. nicotianae var. parasitica (Dast.) Wa-terh.
分类地位：真菌界卵菌门卵菌纲霜霉目，疫霉属，烟草疫霉
病原介绍：在CA培养基上菌落棉絮状、繁茂。菌丝简单,粗2~6m。孢囊梗分枝或不分枝,粗2~3.5m。孢子囊球形,顶生或侧生,大小33~6123~47(m),具乳突1~2个,不脱落。游动孢子从孔口直接释出或经泡囊放出,大小9~147~12(m),鞭毛长6~30m。休止孢子、厚垣孢子球形,藏卵器球形,直径16~34(m)。雄器近球形,围生,大小8~169~16(m)。卵孢子球形,无色至浅黄色,直径14~28m,满器或不满器。生长适温24~28℃,最低9~10℃,最高37℃。
寄主信息：寄主中文名：韭菜
寄主英文名： chinese chive
侵染部位：根、茎、叶、花茎
症状图：

病害症状：叶片及花茎染病 , 多始于中下部 , 初呈暗绿色水浸状 , 长 5～50mm, 有时扩展到叶片或花墓的一半 , 病部失水后明显缝缩 , 引起叶、薹下垂腐烂 , 湿度大时 , 病部产生稀疏白霉 ; 假茎受害呈水浸状浅褐色软腐 , 叶鞘易脱落 , 湿度大时 , 其上也长出白色稀疏霉层 , 即病原菌的孢子囊梗和孢子囊。鳞茎被害 , 根盘部呈水浸状 , 浅褐至暗褐色腐烂 , 纵切片纤弱 ; 根部染病变褐腐烂 , 根毛明显减少 , 影响水分吸收 , 致根寿命大为缩短。
发病规律：以卵孢子在土壤中病残体上越冬 , 翌年条件适宜时 , 产生孢子囊和游动孢子 , 侵染寄主后发病。湿度大时 , 又由病部长出孢子囊 , 借风雨传播蔓延 , 进行重复侵染。北京郊区苗期发病多在 6 月。本病见于 7 月，8 月上旬达高峰后多延续到 10 月下旬。
病害分类：真菌
防治办法： (1) 选用抗病品种。提倡因地制宜选用早发韭 1 号、优丰 1 号韭菜、北京大白根、北京大青苗、汉中冬韭、寿光独根红、山东 9－1 、山东 9－2 、嘉兴白根、平顶山 791 等优良品种 , 减少发病。选好种植韭菜的田块 , 仔细平整好苗床或养茬地 , 雨季到来前 , 修整好田间排涝系统。(2) 进行轮作换茬 , 避免连年种植。 (3) 药剂防治。夏季高温多雨季节发现韭菜疫病中心病区时 , 马上喷洒 72% 锰锌?霜脲 ( 克露、凯克灵、克抗灵、霜疫清、赛露、霜克、霜消、霜疫力克、霜霉敌 ) 可湿性粉剂 700 倍液或 69% 锰锌?烯酰 ( 安克锰锌 ) 可湿性粉剂 600～700 倍液或 60 % 氟吗?锰锌 ( 灭克 ) 可湿性粉剂 700～900 倍液或 52.5% 抑快净水分散粒剂 1500 倍液、60% 琥酮?乙铝?锌 ( 百菌通 ) 可湿性粉剂 500 倍液、66.8% 丙森?缬霉 ( 霉多克 ) 可湿性粉剂 700 倍液 , 隔 10 天左右 1 次 , 连续防治 2～3 次。

总体描述：症状根、茎、叶、花茎等部位均可被害 , 尤以假茎和鳞茎受害重。叶片及花茎染病 , 多始于中下部 , 初呈暗绿色水浸状 , 长 5～50mm, 有时扩展到叶片或花墓的一半 , 病部失水后明显缝缩 , 引起叶、薹下垂腐烂 , 湿度大时 , 病部产生稀疏白霉 ; 假茎受害呈水浸状浅褐色软腐 , 叶鞘易脱落 , 湿度大时 , 其上也长出白色稀疏霉层 , 即病原菌的孢子囊梗和孢子囊。鳞茎被害 , 根盘部呈水浸状 , 浅褐至暗褐色腐烂 , 纵切片纤弱 ; 根部染病变褐腐烂 , 根毛明显减少 , 影响水分吸收 , 致根寿命大为缩短。病原 Phytophthora nicotianae van Breda de Haan，称烟草疫霉；P. capsici Leonian, 称辣椒疫霉 , 均属卵菌。前者孢囊梗自气孔伸出 , 长 10～744m , 孢子囊单生 , 长椭圆形或卵形 , 囊顶乳突明显 , 卵孢子球形 , 淡黄或金黄色 , 直径 20～22.5m。厚垣孢子微黄色圆球形 , 直径 20～40m。病菌发育温限 12～36 ℃ , 25～32 ℃最适。菌丝 50 ℃经 5 分钟致死。后者菌丝丝状 , 无隔膜 , 生于寄主细胞间或细胞里 , 宽 3.75～6.25 m；孢子囊梗无色 , 丝状 ; 孢子囊顶生 , 单胞 , 卵圆形 , 大小 28.01～59.0 24.8～ 43.5m : 厚垣孢子球形 , 单胞 , 黄色 , 壁厚平滑 ; 卵孢子球形 , 直径大约 30m , 雄器约 17 15m , 但有时见不到。传播途径和发病条件以卵孢子在土壤中病残体上越冬 , 翌年条件适宜时 , 产生孢子囊和游动孢子 , 侵染寄主后发病。湿度大时 , 又由病部长出孢子囊 , 借风雨传播蔓延 , 进行重复侵染。北京郊区苗期发病多在 6 月。本病见于 7 月，8 月上旬达高峰后多延续到 10 月下旬。无公害防治法 (1) 选用抗病品种。提倡因地制宜选用早发韭 1 号、优丰 1 号韭菜、北京大白根、北京大青苗、汉中冬韭、寿光独根红、山东 9－1 、山东 9－2 、嘉兴白根、平顶山 791 等优良品种 , 减少发病。选好种植韭菜的田块 , 仔细平整好苗床或养茬地 , 雨季到来前 , 修整好田间排涝系统。(2) 进行轮作换茬 , 避免连年种植。 (3) 药剂防治。夏季高温多雨季节发现韭菜疫病中心病区时 , 马上喷洒 72% 锰锌?霜脲 ( 克露、凯克灵、克抗灵、霜疫清、赛露、霜克、霜消、霜疫力克、霜霉敌 ) 可湿性粉剂 700 倍液或 69% 锰锌?烯酰 ( 安克锰锌 ) 可湿性粉剂 600～700 倍液或 60 % 氟吗?锰锌 ( 灭克 ) 可湿性粉剂 700～900 倍液或 52.5% 抑快净水分散粒剂 1500 倍液、60% 琥酮?乙铝?锌 ( 百菌通 ) 可湿性粉剂 500 倍液、66.8% 丙森?缬霉 ( 霉多克 ) 可湿性粉剂 700 倍液 , 隔 10 天左右 1 次 , 连续防治 2～3 次。

韭菜—辣椒套种技术

　一、韭菜栽培技术

韭菜栽培分直播和育苗移栽两种，生产上为提高土地利用率，节约土地，现多以育苗移栽为主。优点是便于精细管理。培育壮苗，定植时能选苗分级，密度一致，也便于田间管理和收割。

1．播种

（1）品种及播期：选用良种791，该品种的优点是耐热抗寒，夏季生长旺盛，秋冬之间没有明显的休眠期，不需回根，便于保护地栽培，且品质优良、产量高。播种期在春分－清明之间。一般每667平方米施优质农家肥4000－5000千克，做宽2米的平畦。种子选用发芽率高、发芽势强的一年新籽，每667平方米播量2－3千克。

（2）种子处理及播种：用40－50℃温水浸种一昼夜，捞出沥干，用湿布包好，在15－20℃环境下催芽，每天清水淘洗一次，待种子发芽孔发亮，胚根要露未露时播种。播前先上足底水，水渗下后将韭种均匀撒播。为防地下害虫，可用40%辛硫磷1500倍液喷施干畦内，再覆细土1厘米。

2．田间管理

（1）播后管理：出苗前，喷除草剂防草害，一般每667平方米用25%的除草醚＊0.5－0.6千克，或50%的除草剂1号0.1－0.15千克。真叶长出前注意溜水保温，真叶放开后，以保持畦面见干见湿为宜。3－4叶期，可适当施提苗肥，每667平方米追施硫铵15－25千克。

（2）定植：小暑至大暑之间定植。定植前施肥整地，做8－10米长的畦。起苗前苗床要浇足水，然后起苗、炼苗、分级、码齐，剪留4－5厘米的根须，然后拉线开沟，深10－12厘米，沟内施碳铵250－500克或尿素150克。按5厘米码放苗簇，每簇10－15株。行距25厘米，每畦8行，畦宽2米。定植后灌水，5－6天后灌第二水，促其缓苗。

（3）定植后的管理：移栽苗经2－3水后，苗直立开始生长，适当控水，中耕松土，促发根。当韭菜分蘖快速生长时，施一次提苗、分蘖肥，每667平方米随水施入硫铵15－25千克。夏季要排积水，防涝防烂防塌秧，还要及时搭架防倒伏，以达到壮而不倒，旺而不割，促使养分向鳞茎回流。注意防治病害及韭蛆，一般间隔7－10天，于下午3－4点后，顺韭行喷洒一次30%辛硫磷乳油1000倍液，以免光解，并加50%多菌灵500倍液，每667平方米用药液100千克。

3．冬季生产管理

一般小雪前后提早扣棚，夜间盖草苫，内用小拱棚加盖草苫。扣棚后，用铁铲铲去枯叶，用竹耙耧净，用小镐头沿簇间深锄。韭苗萌发后，向簇心施药防蛆（或收第二刀后进行）。韭菜白天及时拉苫抢阳，午后及时盖苫保温，一般白天温度控制在22－25℃，夜间8－12℃。当苗高20－30厘米、达5－7叶时，收割头刀。收割前7天降温，使苗深绿粗壮，白天保持18－20℃，夜间7－10℃，收割后用耙子耧平。当苗高5－6厘米时，借追肥浇1次水，每667平方米施硫铵20－25千克，待韭菜长到15－20厘米时，用化学发生法于晴天中午适量追施二氧化碳气肥，促其光合作用，以保持旺盛生长。7天后，便可收割第二刀，收后待叶鞘干爽，萌发新芽1－2厘米后，再迫一次肥水，并注意通风排湿，防止病害的发生。第三刀后，便刨掉韭菜，移栽辣椒。

二、早春辣椒的栽培技术

1．播种育苗

（1）品种及播期：一般选用湘研一号和湘研十一号，播种期在11月上中旬。每667平方米用种量50克，苗床面积用10平方米，分苗床用40平方米。

（2）种子处理：浸种前进行种子消毒，可用40%甲醛100倍液浸泡10－20分钟，可杀死辣椒炭疽病、枯萎病、病毒病等种传病菌。用清水洗净后，再用60℃温水烫种。将种子倒入水中，并不断搅拌至水温降至30℃，再浸64小时后捞出晾干，用于净纱布或湿毛巾包好置于25－30℃环境下进行催芽（或包好束在腰间催芽）。待有半数种子吐白即可播种。

（3）营养土的配制：选用前茬未种茄科作物的肥沃土壤6份，加腐熟的圈杂肥4份，另外每立方米营养土再加捣细腐熟的大粪干或鸡粪15－20千克。复合肥0.5－1千克，草木灰5－10千克，甲基异柳磷＊0.1千克，50%多菌灵粉或70%敌克松粉25克拌匀过筛。

（4）苗床管理及分苗：足墒下种，播时可单粒播也可撒播，播后床面覆细土0.5－1厘米，再喷25%复方多菌灵物剂600倍液，覆地膜并扣小拱棚。温度白天控制在25℃左右，夜间16－18℃。种子出土后揭去地膜，夜温控制在16℃，并注意防虫、防病、防徒长，培育壮苗。苗龄达30天，幼苗3叶1心时分苗。最好用纸筒或营养钵分苗，每钵2株。

2．定植及管理

一般在2月中下旬开始定植，要求0－10厘米地温稳定在15℃以上。选苗分级，采用壮苗，壮苗标准为：辣椒日历苗龄90－100天，生理苗龄6叶1心，株高15－18厘米，茎粗0.4厘米，节间短，顶分杈，门椒现蕾，根系发达，75%－90%植株现蕾。采用切块育苗时，定植前10－15天浇水切块，定植前10天，适当通风炼苗，增强抗性。

将上茬韭菜刨除后整地施肥，移栽时行距50－60厘米，穴距25－30厘米，每穴1－2株栽植。覆地膜浇足水，密封棚膜，升温保温，加速缓苗。7天后视苗情放风降温排湿，3－4天后，深中耕松土，控水蹲苗。棚内温度白天25－28℃，夜间以保温为主。开花坐果以前，土壤不旱不必浇水。开花前注意通风放气降温降湿，能防止大量落花。结果初期以见干见湿为宜，防止疯长。盛果期为需肥水高峰期，要多追肥浇水。白天温度在25－27℃，夜温保持在17－18℃。为提高坐果率，可用生长素（2，4－D）处理，浓度为15－20毫克/千克，以蘸花较好。结果初期应适当早收，以保证整株丰产，当外界温度白天最高达30℃以上时，把棚四边脚撩开大放风，或整棚膜撤掉。雨季控水并排积水。到7月中旬，拔掉辣椒杆，移栽韭菜。

文章来源： http://www.gs03.com/g/8256.html